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人和哺乳动物细胞基因组DNA制备法1

一、从培养物和组织细胞中提取DNA1

二、从人全血细胞中提取基因组DNA4

从真核细胞中抽提总RNA7

一、异硫氰酸胍-超离心法7

二、NP40法10

三、胍酚氯仿法13

制备高纯度mRNA—寡脱氧胸苷纤维素柱层析法18

制备高纯度mRNA-寡脱氧胸苷乳胶法21

寡聚脱氧胸苷纤维素柱精制mRNA24

质粒DNA的提取27

氯化铯密度梯度超离心提取质粒DNA33

噬菌体DNA的制备和纯化37

小量酵母DNA制备法43

聚合酶链反应技术45

聚合酶链反应-单股构型多态性方法51

反转录聚合酶链反应法54

原位杂交技术56

缺口平移和多头引物64

缺口平移法制备α-32P标记的探针66

随机引物法制备α-32P-dNTP标记DNA探针69

末端标记法70

琼脂糖凝胶电泳72

DNA连接前的脱磷反应74

一、脱磷反应Ⅰ75

二、脱磷反应Ⅱ76

DNA序列分析81

DNA酶Ⅰ“足迹”法86

核失控转录测定法92

分离酵母人工染色体插入片段99

人基因组限制性酶切片段的制备和分离102

DNA的部分酶解104

哺乳动物细胞基因的导入107

一、磷酸钙共转染法107

二、DEAE-葡聚糖法导入基因109

三、脂质转染110

四、电穿孔法112

融合蛋白表达及其多克隆抗体的制备115

附一120

附二124

Southem印迹杂交125

用Southem印迹法分析DNA分子上的DNA酶Ⅰ高敏感位点130

Northern印迹杂交134

感受态细菌制备及转化实验137

cDNA的合成和克隆141

一、单链cDNA的合成141

二、双链cDNA的合成144

三、核酸酶S1消化双链cDNA145

四、核酸酶S1消化产物的分离——蔗糖密度梯度离心法146

五、双链DNA加尾147

七、转化149

六、退火149

λgtll cDNA文库扩增及免疫法筛选151

一、文库扩增151

二、免疫筛选λgtll cDNA文库153

十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳和Western印迹156

一、十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳157

二、Western印迹158

一、35S-甲硫氨酸标记162

35S和32P标记细胞162

二、32P-正磷酸盐标记163

附录一 常用试剂配制165

附录二 有关技术171

附录三 名词解释172

附录四 限制性内切酶的使用方法说明178

附录五 常用限制酶识别序列179

附录六 遗传密码187

附录七 氨基酸符号及密码子188

附录八 相关技术资料189