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第一部分 理论和技术原理2

第一章 基因和基因技术基础2

第一节 基因和基因技术的发展2

第二节 基因和基因组基础10

第三节 生物信息学工具37

第四节 基因操作中的模式生物47

复习题50

第二章 基本技术和工具51

第一节 DNA/RNA的提取52

第二节 电泳技术61

第三节 特异的检测技术67

第四节 工具酶82

第五节 遗传转化88

复习题89

第三章 离体基因扩增91

第一节 聚合酶链式反应91

第二节 PCR反应的组成和设计93

第三节 PCR反应循环及参数98

第四节 PCR中的几个问题99

第五节 各种PCR扩增及其应用102

第六节 其他核酸扩增技术117

复习题123

第四章 重组技术124

第一节 特异的DNA内切酶及其特点125

第二节 连接和重组134

第三节 同源重组技术145

复习题151

第五章 质粒载体153

第一节 质粒生物学和质粒载体153

第二节 质粒载体的功能元件158

第三节 表达载体165

复习题174

第六章 噬菌体衍生的载体175

第一节 λ噬菌体175

第二节 λ噬菌体载体178

第三节 λ噬菌体衍生的质粒载体——柯斯质粒181

第四节 单链DNA载体183

第五节 P1噬菌体衍生的载体186

复习题189

第七章 基因克隆190

第一节 基因组DNA文库191

第二节 cDNA文库195

第三节 克隆筛选的策略201

复习题215

第八章 DNA测序216

第一节 双脱氧终止法DNA测序218

第二节 DNA测序的自动化221

第三节 基因组测序223

第四节 新一代测序技术228

第五节 测序在研究中的应用233

复习题235

第九章 离体突变和基因创建236

第一节 DNA和基因的化学合成236

第二节 离体突变237

第三节 分子进化252

复习题259

第十章 蛋白质组学技术原理260

第一节 蛋白质样本制备260

第二节 复杂样本的蛋白质分离263

第三节 蛋白质酶解及肽段分离266

第四节 肽混合物质谱分析269

第五节 定量蛋白质组学研究技术274

第六节 蛋白质组学数据分析技术280

复习题290

第十一章 酵母和动物基因操作291

第一节 酿酒酵母基因操作292

第二节 毕赤酵母和昆虫细胞表达系统297

第三节 动物细胞培养和转染300

第四节 转基因动物313

第五节 动物基因改造的应用316

复习题319

第十二章 植物转基因321

第一节 转基因载体和外源基因导入技术322

第二节 植物转基因的选择和筛选标记332

第三节 转基因结构和表达335

第四节 基因开发和转基因植物342

复习题348

第二部分 实验操作352

第一单元 基本技术352

实验一 生物信息学实验：基因检索和表达克隆设计352

实验二 实验室基本操作355

实验三 大肠杆菌的培养和分离360

实验四 蛋白质SDS-PAGE电泳362

实验五 质粒DNA的分离366

实验六 基因组DNA提取367

实验七 总RNA的提取371

实验八 聚合酶链式反应（PCR）扩增和电泳观察372

实验九 质粒DNA酶切及凝胶电泳374

实验十 DNA片段的分离纯化376

实验十一 DNA末端的连接377

实验十二 感受态细胞的制备378

实验十三 大肠杆菌的遗传转化379

实验十四 蛋白质二维电泳分离及胶内蛋白质点质谱分析380

实验十五 SSR分子标记385

第二单元 综合实验389

综合实验一 EGFP蛋白质的克隆表达389

综合实验二 植物转基因394

综合实验三 动物细胞基因操作398

附录403

一、常用生物信息学网址404

二、常用核酸、蛋白质数据406

三、度量衡407

四、基因的命名408

五、糖类的结构409

六、MS培养基410

参考文献411

索引413