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第一章 研究背景1

第一节 天然免疫对病原微生物的识别1

一、天然免疫概述1

二、天然免疫的模式识别受体2

第二节 抗病毒天然免疫的信号转导及其调控机制14

一、抗病毒天然免疫信号转导概述14

二、Ⅰ型干扰素基因转录调控机制15

三、模式识别受体介导的天然免疫信号转导18

四、模式识别受体介导的信号转导的调控机制25

第三节 病毒诱导Ⅰ型干扰素表达的早、晚期事件和干扰素效应因子28

一、病毒诱导Ⅰ型干扰素基因表达的早、晚期事件28

二、干扰素诱导的效应因子31

第二章 实验材料和实验方法34

第一节 实验材料34

一、细胞系、细胞培养和细胞因子34

二、病毒34

三、抗体35

四、表达载体35

五、核酸操作及检测试剂盒36

六、其他试剂36

七、耗材36

八、特殊仪器和设备36

第二节 实验方法37

一、表达载体构建和质粒纯化37

二、细胞培养和瞬时转染38

三、原代细胞的分离培养和转染38

四、荧光素酶报告基因实验39

五、蛋白复合物的纯化和质谱鉴定40

六、免疫共沉淀和Western Blot检测41

七、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳42

八、RT-PCR42

九、VSV空斑实验43

十、体外结合核酸实验44

十一、通过逆转录病毒载体构建稳定表达细胞系44

十二、细胞核质分离和亚细胞器分离45

十三、免疫荧光和激光共聚焦显微镜观察45

第三章 实验结果和讨论一：新型核酸受体LSM14A的鉴定及其功能研究47

第一节 研究背景与立项依据概述47

第二节 实验结果48

一、基因库筛选48

二、过量表达LSM14A激活ISRE、NF-κB和IFN-β启动子50

三、下调内源性LSM14A表达抑制病毒感染诱导的Ⅰ型干扰素表达54

四、LSM14A参与细胞抗病毒反应61

五、LSM14A参与SeV感染早期Ⅰ型干扰素的表达62

六、人肠癌HCT116细胞LSM14A-Flag-Knock-in细胞系的构建63

七、LSM14A定位于细胞质66

八、LSM14A结合poly（I:C）和poly（dA:dT）67

九、LSM14A与RIG-Ⅰ、VISA相互作用69

十、LSM14A介导Ⅰ型干扰素表达需要RIG-I的参与71

十一、LSM14A、RIG-I、VISA与P-bodies的共定位74

第三节 小结和讨论76

第四章 实验结果和讨论二：ISG56负反馈调节病毒感染诱导Ⅰ型干扰素表达80

第一节 研究背景与立项依据概述80

第二节 实验结果81

一、ISG56和ISG54是MITA相互作用蛋白81

二、过量表达ISG56抑制病毒诱导的ISRE和IFN-β的激活84

三、内源性ISG56的表达下调促进病毒感染诱导的IFN-β激活89

四、ISG56负调控细胞抗病毒反应92

五、ISG56阻断MITA-VISA和MITA-TBK1的相互作用94

第三节 小结和讨论97

第五章 研究总结和展望101

参考文献103

缩略词表126

致谢129