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第一篇实验理论1

第一章吸收光谱法1

第一节光谱分析基础知识1

一、光的基本性质1

二、吸收光谱2

三、物质颜色与光吸收2

第二节光吸收的基本定律3

一、吸光度与透光率4

二、吸收光谱分析的基本定律4

三、吸光系数4

四、偏离Beer定律的因素5

第三节吸收光谱法的应用6

一、定性分析6

二、定量分析7

三、吸收光谱分析的条件控制8

第四节分光光度计的基本结构和使用9

一、分光光度计的基本结构9

二、分光光度计的使用与要求10

第二章电泳技术12

第一节电泳的基本原理和分类12

一、电泳的基本原理12

二、电泳的迁移率13

三、电泳的分类13

第二节电泳的影响因素14

一、样品的性质14

二、电场强度14

三、缓冲液的性质14

四、支持介质15

第三节区带电泳15

一、醋酸纤维薄膜电泳15

二、琼脂糖凝胶电泳16

三、聚丙烯酰胺凝胶电泳16

第四节特殊的电泳21

一、等电聚焦电泳21

二、双向电泳21

第五节电泳后的染色22

一、蛋白质的染色22

二、核酸的染色23

第三章层析法24

第一节层析法的原理与分类24

一、层析法的基本原理24

二、层析法的分类24

三、柱层析的基本组成25

第二节常用的层析法26

一、薄层吸附层析26

二、分配层析27

三、离子交换层析28

四、凝胶层析29

五、亲和层析32

六、高效液相层析33

第四章酶学分析34

第一节酶的分离纯化及鉴定34

一、酶的分离纯化34

二、酶制剂的鉴定34

第二节酶活性测定35

一、酶活性测定方法35

二、酶的活性单位36

第三节酶促反应动力学研究37

一、底物浓度对酶促反应速度的影响37

二、温度对酶促反应速度的影响37

三、pH值对酶促反应速度的影响38

四、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响38

五、酶促反应样品及参比溶液的设定38

第四节酶法分析38

一、单酶反应定量法39

二、耦联酶反应定量法40

第五节同工酶分析40

第六节酶在生物医学上的应用41

一、酶在疾病诊断中的应用41

二、酶在疾病治疗中应用42

第五章蛋白质的分离与纯化43

第一节蛋白质分离纯化的原理和基本方法43

一、沉淀法43

二、透析与超滤44

三、超速离心45

四、层析45

五、电泳45

第二节选择蛋白质分离纯化方法的策略45

第三节蛋白质的制备46

一、材料的选择与预处理46

二、细胞的破碎46

三、提取46

四、分级分离步骤47

五、结晶47

第四节蛋白质的浓缩、干燥和保存47

一、浓缩47

二、干燥48

三、样品的保存48

第六章核酸的分离纯化与鉴定分析49

第一节核酸分离纯化49

一、核酸分离纯化的原则及要求49

二、核酸提取的主要步骤49

三、核酸的浓缩、沉淀与洗涤51

第二节核酸的鉴定与分析52

一、紫外分光光度法的定量、定性分析52

二、核酸凝胶电泳52

三、聚合酶链反应（PCR）技术54

第二篇实验篇58

第七章基础性实验58

实验一蛋白质含量的测定58

一、酚试剂法58

二、BCA法60

三、双缩脲法61

四、紫外吸收法62

实验二核酸含量的测定64

一、二苯胺法测定DNA含量64

二、地衣酚法测定RNA含量65

三、紫外分光光度法分析核酸的纯度及浓度66

实验三肾上腺素与胰岛素对血糖浓度的影响——邻甲苯胺法测定血糖浓度68

实验四血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳70

实验五血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳72

实验六SDS-PAGE测定蛋白质分子量74

实验七氨基酸的纸层析77

实验八离子交换层析分离混合氨基酸78

实验九凝胶层析分离血红蛋白与鱼精蛋白80

实验十血清谷丙转氨酶酶活性测定（改良Mohun法）82

实验十一底物浓度对酶活性的影响——碱性磷酸酶Km值的测定85

实验十二温度和pH值对酶活性的影响87

实验十三丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制89

第八章综合性实验91

实验十四常见血液生化指标的酶终点法分析91

一、酶法测定血清甘油三醋91

二、酶法测血清胆固醇93

三、磷钨酸——镁沉淀法（PTA-Mg2+法）测定血清HDL-C含量94

四、酶法测定血液葡萄糖95

实验十五乳酸脱氢酶（LDH）的分析97

一、血清乳酸脱氢酶（LDH）总活性测定97

二、血清乳酸脱氢酶同工酶分离——琼脂糖凝胶电泳法98

实验十六血清免疫球蛋白IgG的分离纯化与鉴定101

一、IgG的分离与纯化101

二、IgG制品鉴定法103

实验十七谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白的表达及纯化105

一、细菌转化、培养和GST融合蛋白的诱导表达105

二、Westernblotting检测GST融合蛋白表达106

三、亲和层析纯化GST融合蛋白108

四、SDS-PAGE鉴定GST融合蛋白的纯度109

实验十八外周血白细胞基因组DNA的分离纯化、鉴定与分析110

一、外周血白细胞DNA的提取（NaI法）110

二、紫外分光光度法分析DNA的纯度及浓度111

三、DNA的琼脂糖凝胶电泳111

四、聚合酶链反应（PCR）112

实验十九小鼠肝组织细胞RNA的分离纯化、鉴定与分析114

一、TRIzol法提取RNA114

二、紫外分光光度法分析RNA的纯度及浓度115

三、RNA的甲醛变性凝胶电泳115

四、逆转录PCR（RT-PCR）116

实验二十质粒DNA的提取、酶切和电泳分析118

一、SDS-碱裂解法小量制备质粒DNA118

二、质粒DNA限制性内切酶酶切分析120

三、质粒DNA酶切产物的非变性PAGE分析120

第九章研究设计性实验122

实验二十一碱性磷酸酶的分离纯化、鉴定及酶动力学实验122

实验二十二载脂蛋白AI的原核表达、分离纯化及鉴定分析123

附录124

附录一生物化学实验须知124

附录二实验室基本操作125

附录三试剂分级及常用酸碱溶液129

附录四常用缓冲液和试剂的配制130

参考文献136