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第1章 绪论1

第一节 分子诊断学的发展简史1

第二节 分子诊断学的应用2

第2章 基因组与基因组学4

第一节 基因组和基因组学的概念4

一、定义4

二、基因组大小与C值矛盾5

三、基因组学的意义5

第二节 原核生物基因组6

一、特点6

二、类核6

三、质粒7

四、转座因子9

第三节 病毒基因组11

一、核酸的主要类型11

二、大小和碱基组成12

三、结构与功能特征12

第四节 真核生物基因组13

一、细胞核基因组14

二、细胞器基因组16

第五节 人类基因组计划16

一、人类基因组计划的概况16

二、人类基因组概貌17

三、人类基因组多样性19

第3章 生物大分子的分离与纯化21

第一节 核酸分离纯化的总原则21

一、材料与方法的选择22

二、技术路线的设计22

三、核酸的鉴定、保存24

第二节 真核生物DNA的分离纯化26

一、分离纯化的方法26

二、DNA片段的回收27

第三节 原核生物DNA的分离纯化30

细菌DNA的分离纯化30

第四节 病毒DNA的分离纯化31

第五节 质粒DNA的分离纯化31

一、质粒DNA的提取与纯化方法31

二、质粒DNA的进一步纯化32

第六节 RNA的分离纯化33

一、RNA分离的条件选择33

二、总RNA的分离纯化34

三、mRNA的分离纯化34

第七节 蛋白质的分离纯化35

一、蛋白质分离纯化的原则和一般程序36

二、材料选择36

三、细胞破碎的方法37

四、分离蛋白质的方法37

五、蛋白质分离纯化的条件因素39

六、蛋白质含量和纯度分析40

七、蛋白质的保存41

第4章 DNA重组技术42

第一节 工具酶与基因载体43

一、工具酶43

二、载体49

第二节 目的基因与载体连接54

一、目的基因的制备54

二、载体的选择55

三、目的基因片段与载体的体外连接55

第三节 重组DNA分子的导入、鉴定与表达56

一、将外源DNA分子导入宿主细胞57

二、目的基因的鉴定58

三、目的基因的表达59

第5章 DNA测序技术62

第一节 双脱氧链末端终止法62

一、测序原理62

二、测序策略64

三、测序体系65

四、Sanger法的衍生方法67

第二节 化学降解法67

一、测序原理67

二、测序体系69

三、化学降解法与双脱氧链末端终止法的比较70

第三节 自动化测序70

一、全自动激光荧光DNA测序原理70

二、全自动激光荧光DNA测序程序71

三、全自动激光荧光DNA测序注意事项72

第四节 DNA测序技术的应用72

一、对未知DNA序列进行测定72

二、对已知DNA序列进行测定73

第6章 聚合酶链反应技术74

第一节 PCR技术原理74

一、PCR基本原理74

二、PCR体系75

三、PCR基本步骤78

四、PCR扩增产物的分析80

五、PCR常见问题83

六、PCR技术的质量控制84

第二节 定量PCR85

一、荧光定量PCR原理85

二、荧光化学86

三、定量方法86

四、荧光定量PCR的应用87

第三节 反转录PCR法与原位PCR87

一、反转录PCR法87

二、原位PCR88

第四节 PCR技术的应用89

一、遗传病的诊断与产前诊断89

二、致病病原体的检测89

三、癌基因的检测和诊断90

四、DNA指纹、个体识别、亲子关系鉴定及法医物证90

五、动、植物检疫90

六、其他90

第7章 核酸分子杂交技术91

第一节 核酸分子杂交基本原理91

一、基本原理91

二、影响因素93

第二节 核酸探针的制备94

一、核酸探针的类型94

二、核酸探针的标记94

三、核酸分子杂交结果的检测96

第三节 核酸分子杂交常用方法96

一、Southern印迹杂交96

二、Northern印迹杂交99

三、斑点及狭缝印迹杂交100

四、菌落杂交100

五、原位杂交100

六、液相杂交101

第四节 核酸分子杂交技术的应用102

第8章 生物芯片技术104

第一节 DNA芯片104

一、DNA芯片的分类与原理104

二、DNA芯片的制备105

三、样品的制备107

四、分子杂交反应107

五、信号检测与结果分析107

六、DNA芯片技术在医学领域的应用107

第二节 蛋白质芯片109

一、蛋白质芯片原理和分类109

二、蛋白质芯片制备111

三、蛋白质芯片技术在医学领域的应用111

第9章 蛋白质分析技术113

第一节 概述113

第二节 双向凝胶电泳及图像分析技术114

一、2-DE的概念114

二、样品制备115

三、第一向电泳——IEF116

四、第二向电泳——SDS-PAGE117

五、染色及显影方法117

六、2-DE图谱的图像分析118

七、2-DE的特点119

第三节 生物质谱119

一、质谱分析的基本原理120

二、生物质谱技术121

三、生物质谱仪122

第四节 其他蛋白质组分析技术123

一、蛋白质鉴定技术123

二、蛋白质相互作用分析技术123

三、生物信息学技术125

第五节 Western印迹法127

第10章 感染性疾病的分子诊断129

第一节 病毒的基因检测130

一、乙型肝炎病毒131

二、丙型肝炎病毒133

三、单纯疱疹病毒134

四、巨细胞病毒135

五、风疹病毒135

六、人乳头瘤病毒136

七、人类免疫缺陷病毒139

第二节 病原菌的基因检测140

一、结核分枝杆菌141

二、淋病奈瑟菌142

三、幽门螺杆菌142

四、细菌耐药基因检测143

第三节 衣原体的基因检测145

一、沙眼衣原体145

二、肺炎衣原体146

第四节 支原体的基因检测146

一、肺炎支原体147

二、解脲脲原体147

第五节 梅毒螺旋体的基因检测147

第六节 原虫的基因检测148

一、弓形虫148

二、利什曼原虫149

三、溶组织内阿米巴149

四、疟原虫150

第七节 真菌的基因检测151

一、念珠菌151

二、新型隐球菌152

三、烟曲霉153

第11章 遗传性疾病的分子诊断154

第一节 遗传性疾病的分类154

一、单基因遗传病155

二、多基因遗传病155

三、染色体畸变遗传病156

第二节 遗传性疾病的分子诊断策略157

一、遗传性疾病分子诊断策略的基础157

二、直接诊断策略158

三、间接诊断策略160

第三节 遗传性疾病的分子诊断161

一、单基因病的基因诊断161

二、多基因病的基因诊断164

三、遗传性疾病基因诊断的意义165

第12章 肿瘤的分子诊断167

第一节 肿瘤相关基因167

一、癌基因167

二、抑癌基因171

三、其他肿瘤相关基因173

四、癌基因、抑癌基因与肿瘤的发生174

第二节 肿瘤基因诊断174

一、肿瘤基因诊断的策略174

二、肿瘤基因诊断的原理和方法175

三、常见肿瘤相关基因的检测176

参考文献178