小鼠发育生物学与胚胎实验方法2025|PDF|Epub|mobi|kindle电子书版本百度云盘下载

小鼠发育生物学与胚胎实验方法PDF格式电子书版下载

注意：本站所有压缩包均有解压码： 点击下载压缩包解压工具

五、灭活仙台病毒的制作 341

第一节　小鼠发育生物学研究的意义3

目录3

第一篇 发育生物学与小鼠的发育3

第一章　发育生物学研究与发育的基本规律3

二、小鼠发育遗传学的根源4

第二节　小鼠发育遗传学的研究历史4

一、小鼠遗传学研究的初始阶段4

一、实验性小鼠胚胎学的起源6

第三节　实验性小鼠胚胎学的研究6

二、小鼠发育的基因调控研究历史7

三、小鼠新基因及发育性变异的系统性研究8

一、发育生物学需解决的问题10

第四节　发育生物学的基本问题与概念10

二、发育生物学的基本概念12

一、早期发育的基本过程26

第五节　小鼠胚胎发育的基本过程26

二、小鼠胚胎发育的基本过程27

二、生物发育始于受精29

第六节　胚胎期发育的基本规律29

一、卵细胞具有极性29

四、原肠期与胚层形成30

三、卵裂是一系列迅速的细胞分裂30

五、组织细胞分化和器官形成31

第二章　小鼠的早期胚胎发育概况33

一、生殖细胞的起源以及向生殖嵴的移动37

第一节　生殖细胞的起源、移动及性别确定37

二、性别确定与生殖细胞38

一、精子生成39

第二节　精子、卵子的发生39

三、卵子和精子发生的比较41

二、卵子发生41

一、排卵42

第三节　排卵、受精和卵细胞骨架的组建42

二、受精43

三、受精前后卵细胞的细胞骨架组建45

二、早期卵裂中的蛋白表达46

第四节　早期卵裂与胚泡形成46

一、卵裂胚胎的特征46

三、细胞的聚集和极化47

五、胚胎核发育潜能的限制48

四、细胞聚集与粘连中的变化48

一、植入49

第五节　植入与胚层的形成和分化49

二、原肠胚形成开始与滋养外胚层的衍化50

三、原始外胚层的形成51

四、原肠胚形成以及中胚层和内胚层的形成53

五、结节的形成55

一、胚外内胚层57

六、中胚层组织多样化的产生57

第六节　胚外组织的形成57

二、内脏内胚层中的基因表达58

四、胚外中胚层的分化59

三、壁内胚层中的基因表达59

五、胎盘的结构和功能60

一、印刻作用61

第七节　发育中的印刻作用61

二、X-灭活62

三、单性生殖63

一、模式系统64

第三章　模式系统及躯体计划模式64

第一节　模式系统与模式生物64

二、模式生物：脊椎动物65

三、小鼠是研究人类发育的模式生物66

一、脊椎动物体轴和胚层68

第二节　躯体计划模式与体节的作用68

三、体节形成和模式化70

二、原肠胚期躯体的计划模式70

一、小鼠早期胚胎细胞的命运74

第三节　早期胚胎细胞命运决定的模式机制74

三、诱导中胚层的信号75

二、来自植物区域的信号诱导中胚层75

一、前内脏内胚层的模式及细胞运动76

四、中胚层特异基因表达的时间和调控76

第四节　前内脏内胚层及其对胚胎模式的影响76

二、脊椎动物前部发育的基本要素77

三、前内脏内胚层影响胚胎前部模式78

一、原条与组织区79

第五节　原条和组织区的作用与神经诱导79

二、组织区的作用81

三、组织区与神经诱导84

一、脊椎动物体轴的特化85

第六节　哺乳动物的体轴发育85

二、脊椎动物体轴的早期确定86

三、影响小鼠胚胎体轴模式的因素88

一、左右轴的形成与不对称性91

第七节　体轴发育的早期不对称性91

三、脊椎动物的器官左右位置是由遗传控制的92

二、内部器官的左右特异性92

四、左右模式的演化94

五、Nodal与Lefties的不对称表达95

一、细胞分化与发育97

第四章　细胞分化、形态发生与器官形成97

第一节　细胞分化97

二、基因表达模式的可逆性和遗传性98

三、细胞分化中特定基因的表达及调控100

一、肌细胞分化模型102

四、细胞分化与程序性细胞死亡102

第二节　细胞分化模型102

二、血细胞分化模型104

一、形态发生的内容105

第三节　胚胎的早期形态发生105

二、细胞的社会性106

四、细胞粘附107

三、细胞识别107

五、细胞连接108

六、细胞迁移110

七、细胞与细胞外基质的相互作用112

八、芽的形态发生模式113

一、尾芽与体节及其衍生物115

第四节　器官发生115

二、肢体发育是典型的器官发育模式119

四、肠的发生120

三、肾发生中的诱导模式120

五、芽的形态发生与肺的发育121

二、细胞增殖、细胞周期调控与生长发育123

第五章　胚胎生长发育调控和胚胎后发育123

第一节　细胞增殖与生长发育123

一、生长的形式123

第二节　程序性细胞死亡及其在发育中的作用125

一、胚胎发育中PCD的作用126

二、PCD的调控及细胞因子的影响127

三、小鼠的凋亡相关基因敲除实验129

第三节　机体发育大小的调控130

四、PCD进化和起源130

一、机体发育大小受到综合因素的控制131

二、细胞生长控制发育大小132

三、细胞增殖的停止控制机体发育大小133

四、细胞死亡控制机体发育的大小135

五、细胞数量的调整与总细胞质量的正常136

一、发生在生长板上的长骨的生长137

第四节 发育器官有其内在的生长程序137

三、成年哺乳动物皮肤和肠上皮不断被干细胞的增殖所代替138

二、脊椎动物横纹肌的生长依靠拉力138

一、衰老的机制139

第五节　生长、衰老和生物进化139

二、衰老与遗传142

三、生物发育与进化143

一、神经系统的基本形成过程145

第六章　神经系统的发育145

第一节　神经系统的发生145

二、脊椎动物神经系统由神经板衍化而来147

三、早期脑和神经管区域性差异的产生148

一、旁侧抑制限定神经前体细胞的发生149

第二节 神经系统中细胞特异性的形成149

二、脊髓分化依赖于背腹侧信号150

三、神经元来自细胞的非对称分裂152

一、神经元细胞骨架的组成成分153

第三节 神经系统发生中的细胞骨架153

二、神经细胞骨架的发生过程154

一、神经管背腹化模式的调控155

第四节　神经系统形成中的基因调控155

二、神经营养因子及信号转导158

第五节　突触的形成和伸长160

一、神经肌接头的突触形成期161

二、神经肌接头之间的细胞联系162

三、生长锥164

四、轴突的诱导及生长锥引导分子166

一、 Schwann细胞的发育168

第六节 Schwann细胞及其前体细胞在神经发育中的调控作用168

二、Schwann细胞及其前体对神经发育的调节169

三、Schwann细胞对自身存活的调节171

一、脊椎动物的四肢由肢芽发育形成172

第七章 四肢、骨骼、肌肉与血管的发育172

第一节　脊椎动物四肢发育172

三、肢体在三个轴向的发育模式173

二、四肢的发生与位置信息相关173

四、同源盒基因与肢体发生模式相关并决定肢体的位置176

第二节　骨组织的发育177

五、肢体的肌肉、软骨、肌腱的发育177

二、凝集区与骨骼发育178

一、骨的发生与模式形成178

三、BMPs对骨骼发育的调控179

四、基质金属蛋白酶在骨发生中的作用180

五、骨形成的方式181

六、骨组织中细胞的起源与分化184

七、骨基质的矿化186

第三节 肌肉的发育188

二、碱性螺旋基因家族的转录因子189

一、MyoD家族的肌特异性转录因子189

三、生长因子在肌发生过程中的调控作用190

四、肌肉的发生193

一、血管的发生和毛细血管的形成195

第四节 血管的发生195

二、大血管的形成196

四、胚胎循环197

三、血管平滑肌的分化和表型变化197

一、鳃弓和咽区的形成198

第八章 颅颌面部与口腔的发育198

第一节 头颅面部的发育198

二、面部发育过程200

一、神经嵴细胞的形成、迁移和分化202

第二节 神经嵴细胞与外胚间充质细胞的发育202

二、神经嵴细胞分化迁移的影响因素205

三、颅神经嵴与口腔颌面部的发育207

四、信号分子对颅神经嵴来源的外胚间充质的基因调控209

一、腭的发育211

第三节 腭的发育及腭裂的形成机制211

二、腭裂形成213

三、生长因子、致畸原受体与腭裂形成的关系215

第四节 早期牙胚发生216

一、牙胚发育的起始和特化217

二、早期牙胚发育中的上皮-间充质的信号传递途径218

三、影响牙齿发育的因素223

四、牙齿发育中的细胞凋亡226

五、牙齿发育中的神经生长因子和神经支配227

二、胚胎干细胞与多能干细胞的来源231

第九章 干细胞231

第一节 关于干细胞与胚胎干细胞231

一、干细胞研究历史及现状231

四、干细胞的生物学行为232

三、成体干细胞和肿瘤干细胞232

五、干细胞的诱导分化234

第二节 几种重要的干细胞235

六、小鼠胚胎干细胞的研究意义235

一、神经干细胞和神经嵴干细胞236

二、骨骼肌干细胞238

五、骨髓基质干细胞和间质干细胞242

三、肝脏干细胞242

四、造血干细胞242

六、胰腺干细胞243

七、角膜干细胞244

一、实验小鼠的起源247

第二篇 小鼠胚胎实验方法247

第一章　实验用小鼠的起源和生物学特性247

第一节 实验小鼠的起源247

二、近交系的起源及小鼠遗传学特征248

二、小鼠在发育生物学研究中的价值248

四、常用近交系小鼠品系特征252

五、用于遗传性疾病研究的小鼠动物模型255

一、鼠皮毛的颜色和遗传学256

第二节 鼠皮毛颜色、色素突变与遗传学256

二、ABCD色小鼠257

三、点突变小鼠258

一、小鼠解剖生理学特点260

四、其它突变小鼠260

第三节 小鼠的生物学特征和主要品系260

二、生物学行为特点263

三、小鼠的主要品种和品系264

一、小鼠生殖系统解剖学特点266

第四节 小鼠的生殖特性266

二、小鼠排卵和性周期特点267

三、受精与繁殖271

一、饲养和管理272

第五节 小鼠的饲养与常规实验操作272

二、体温与水的调节273

三、血液的采集和静脉注射274

四、麻醉和镇痛275

一、环境因素277

第六节 影响小鼠动物试验的因素277

三、应激280

二、饮水与食物280

五、小鼠的非传染性疾病281

四、动物行为281

第七节 小鼠胚胎实验中的有关概念283

一、建立小鼠正常交配、诱导超排卵288

第二章 小鼠的体外受精及胚胎移植的实验操作288

第一节 小鼠精、卵细胞获取及体外受精288

二、卵母细胞与精子的体外分离及体外受精290

三、单性生殖卵母细胞的活化292

四、小鼠卵母细胞显微受精方法293

第二节 假孕雌鼠的胚胎移植294

一、胚胎的输卵管移植295

二、胚胎的子宫转移298

三、剖宫产及小鼠的哺育299

二、基因转移方法300

第三章 基因转移技术、转基因小鼠与基因敲除300

第一节 基因转移方法与转基因动物300

一、转基因技术的发展300

一、转基因小鼠作为人类疾病的动物模型302

第二节　转基因小鼠的应用302

二、转基因小鼠作为基因治疗的模型303

三、转基因小鼠用于免疫学研究304

六、利用启动子指导的基因表达消除特异的细胞谱系305

四、转基因小鼠用于肿瘤学研究305

五、转基因小鼠在发育遗传学上的应用305

一、转移基因的设计306

第三节　DNA重组基因转移技术306

二、DNA显微注射系统308

三、原核的DNA显微注射313

一、建立提供DNA注射所用受精卵的雌鼠系319

第四节 转基因和突变鼠系的建立319

二、建立提供胚胎干细胞注入囊胚的雌鼠系321

三、转基因实验中的各种鼠系322

二、基因敲除小鼠的制备325

第五节 基因敲除小鼠325

一、概述325

三、直接型与诱导型基因敲除326

四、基因敲除的主要应用领域327

五、问题和展望329

一、分离卵裂期胚胎细胞、产生聚合嵌合体330

第四章　嵌合体小鼠与核转移技术330

第一节 嵌合体小鼠的产生330

二、用于囊胚注射的显微注射系统332

三、囊胚选择性显微注射以产生嵌合体333

四、逆转录病毒感染胚胎及子宫内注射336

五、小鼠两细胞胚胎的电融合337

六、嵌合度检测338

二、制作固定吸管和注射吸管339

第二节　小鼠胚胎的核移植339

一、胚胎分离339

四、细胞核注入无核单细胞340

三、去除卵细胞核340

第五章　转基因鼠的分析342

第一节　转基因鼠中外源基因的分析342

一、从鼠尾中提取高分子量的DNA343

第二节 目标DNA的提取343

二、从9.5天P.C的卵黄囊或晚期胚胎中提取高分子量DNA344

一、检测植入后鼠胚的少量小基因片段345

第三节 鼠胚胎少量小片段DNA的PCR检测345

二、胚胎组织或卵黄囊匀浆的PCR分析346

二、转基因产物或表型的定量347

一、转移基因的定量347

第四节　确立纯合子转基因鼠或胚胎347

第五节 克隆转基因与宿主DNA接合部348

六、用侧翼引物做PCR分析348

三、分裂间期核的原位杂交348

四、繁殖测试348

五、用一个侧翼探针进行Southern blot分析348

一、用转基因筛选入噬菌体文库349

一、鼠细胞的核型分析及显带350

第六节 鼠细胞的核型分析及染色体整合基因定位350

二、质粒回收和反向PCR350

二、原位杂交定位染色体的整合基因352

一、选择适用于谱系分析的转基因动物354

第七节　转基因鼠的报告基因检测354

三、β-半乳糖苷酶（LacZ）活性染色355

二、三种不同的转基因表达模式355

四、检测带有多种珠蛋白基因的转基因细胞的DNA-DNA原位杂交技术357

第一节　报告基因在研究转基因鼠胚胎的转录规律中的应用359

第六章　报告基因与细胞标记在细胞谱系研究中的应用359

一、报告基因的设计360

二、功能检验362

三、分离与纯化注射用DNA片段363

四、报告基因活性的整胚染色364

五、转染基因的PCR鉴定365

六、报告基因的表达分析366

七、注意事项367

一、细胞标记和植入确定细胞谱系与命运图谱370

第二节　植入后鼠胚胎中的细胞嫁接与标记370

二、培养6.5～8.5天P.C的胚胎371

三、用于植入的组织块的分离372

四、对6.5天胚胎的细胞植入与标记373

五、标记与植入374

六、被标记胚胎的分析375

七、注意事项376

一、体外培养系统378

第一节　胚胎体外培养系统378

第七章　各阶段胚胎的体外分离、培养378

二、培养中的注意事项380

二、着床前胚胎或囊胚的获取381

一、收集及转移胚胎用吸管的制作381

第二节　获取植入前胚胎或囊胚381

三、植入前各阶段胚胎所需培养液的准备386

一、植入后各阶段胚胎的分离390

第三节　植入后各阶段胚胎的分离、培养390

二、植入后胚胎和组织的培养396

一、植入后各阶段胚层及生殖细胞的分离397

第四节　植入后各阶段胚层及生殖细胞的分离及培养397

二、从不同阶段胚胎获得的原始胚芽细胞的培养400

三、畸胎瘤细胞的培养402

一、肾被膜下组织的植入403

第五节 肾被膜下组织移植及卵巢移植403

二、卵巢的移植404

一、胚胎干细胞的体外培养406

第一节　胚胎干细胞的培养406

第八章　小鼠胚胎干细胞的实验操作406

二、滋养层细胞的制备408

一、选择宿主鼠系，产生纯合子突变410

第二节　胚胎干细胞的获得与分离410

二、胚胎干细胞的分离412

一、设计靶载体、制备用于电穿孔的DNA414

第三节 胚胎干细胞外源DNA导入及DNA检测414

二、电穿孔法将DNA导入ES细胞415

三、单个胚胎干细胞克隆的分离及DNA检测416

一、干细胞生物工程422

第一节 干细胞生物工程422

第九章 干细胞生物工程与多能干细胞的分离和鉴定技术422

二、干细胞研究所面临的问题423

三、干细胞治疗和免疫排斥424

一、干细胞培养条件的确定425

第二节 多种干细胞的体外培养和分离技术425

二、从组织块中分离干细胞427

二、单层培养克隆法429

一、克隆化培养及其意义429

第三节 单克隆细胞的培养和分离429

三、悬浮细胞的克隆431

五、悬浮克隆的分离432

四、用克隆环分离克隆432

一、密度梯度离心分离法433

第四节 离心、磁珠、荧光激活等分离方法433

四、其他基于抗体的分离方法434

三、荧光激活细胞分离法434

二、磁激活细胞分离法434

三、体外多向分化和横向分化功能的检测435

二、增殖能力435

第五节 干细胞生物学性状的检测435

一、克隆形成能力和自我维持能力的体外检测435

五、其他检测技术437

四、基于抗体的鉴定技术437

二、基因组分子多态的生物学特征439

一、基因组研究的意义439

第十章　小鼠基因组研究与单细胞RT-PCR cDNA消减杂交439

第一节　小鼠基因组研究439

三、单核苷酸多态性（SNP）研究440

四、SNP分析的方法442

二、试剂材料准备445

一、简介445

第二节 单细胞RT-PCR cDNA消减杂交445

三、实验方法步骤447

一、哺乳动物胚胎的冻存的发展450

第一节　哺乳动物胚胎的慢冻存450

第十一章　受精卵与胚胎的冻存处理与胚胎性别鉴定450

二、冷冻保护剂的选择和冻存方法451

三、冷冻保护剂冻存中的注意事项452

二、材料和方法453

一、概述453

第二节　哺乳动物胚胎的玻璃化冻存453

三、注意事项455

一、利用逆转录病毒DNA分子探针确定性别457

第三节 鼠胚胎性别鉴定457

一、部分肝脏切除458

第四节　小鼠组织外科分离458

二、通过羊膜细胞核的染色来区别胚胎的性别458

第五节　从鼠胚胎组织中分离总RNA459

四、尾静脉采血459

二、脾切除459

三、肾切除459

三、注意事项460

二、方法步骤460

一、材料试剂460

二、固定461

一、取材461

第十二章　小鼠胚胎标本的制作及基因、基因产物检测461

第一节　小鼠胚胎标本的制作461

三、包埋与切片462

四、整胚包埋或整装标本463

一、组织固定、包埋与切片464

第二节　小鼠胚胎组织切片的免疫组化及原位杂交检测464

二、胚胎切片的免疫组化染色467

三、利用RNA探针进行切片放射性原位杂交染色468

四、胚胎切片非放射性原位杂交473

一、全胚标本的免疫组化染色477

第三节 全胚标本的免疫组化染色与凋亡检测477

二、程序性细胞死亡的全胚分析478

第四节　整胚包埋小鼠胚胎标本原位杂交染色480

一、整胚包埋标本原位杂交481

二、双色原位杂交483

三、双色荧光素的原位杂交487

四、可选择的酶反应底物488

六、所需的主要试剂和溶液493

五、原位杂交后whole-mount胚胎组织的包埋及切片493

三、浮片的杂交498

二、厚冷冻切片的准备498

第五节　厚浮片的全胚原位杂交498

一、石蜡切片的准备498

第六节 基因转录与基因表达产物同时定位的检测499

四、探针在浮片上的免疫定位499

二、过氧化物酶抗过氧化物酶法（PAP）500

一、利用辣根过氧化物联结的二抗对组织的免疫定位500

三、抗生物素-生物素-过氧化物酶（ABC）染色501

二、小鼠牙乳头细胞培养502

一、小鼠牙胚培养502

第十三章 小鼠牙胚发育与腭裂动物模型的建立与分析502

第一节 小鼠牙胚及相关细胞培养502

二、小鼠牙胚特异基因的筛选503

一、小鼠牙胚cDNA文库的构建503

第二节　小鼠牙胚cDNA文库的构建等503

一、常用的实验动物模型505

第三节　腭裂小鼠动物模型505

三、小鼠已知特异牙胚基因的克隆505

二、影响腭裂发生率的因素506

二、小鼠腭突正常发育与腭裂形成中差异cDNA文库的建立508

一、腭裂模型的建立508

第四节　小鼠腭部发育与腭裂形成中差异cDNA文库的建立508

三、文库的鉴定509

一、消减杂交技术在发育畸形研究中的意义510

第五节 消减杂交技术筛选腭裂形成相关基因510

四、结果分析510

二、改良消减杂交方法511

第十四章 小鼠神经嵴细胞、外胚间充质细胞及神经系统组织细胞的培养512

第一节 神经嵴细胞的培养方法512

一、培养基512

二、神经嵴细胞分离培养方法512

三、神经嵴细胞的生长情况和鉴定513

四、神经嵴细胞取材过程中所需要注意的问题513

第二节 外胚间充质细胞的培养514

一、材料和器械514

二、分离培养步骤514

第三节 神经组织切片培养的解剖准备步骤及切片培养515

一 、基本原则515

二、仪器和设备516

三、解剖和组织准备516

四、神经组织切片的培养517

一、Sehwann细胞裂解和培养518

二、用抗小鼠IgG包被塑料培养瓶518

三、成纤维细胞的免疫吸附518

第四节 从外周神经培养基中纯化鼠施万细胞518

第五节 新生鼠星形胶质细胞和神经元的原代培养519

第六节 新生鼠脑少突胶质前体细胞及少突胶质细胞的培养520

第七节 成星形细胞的分离和星形细胞的原代培养521

第一节 骨髓基质细胞与骨髓基质干细胞的培养523

一、骨髓基质干细胞概述523

第十五章　小鼠骨软骨组织来源细胞的培养523

二、骨髓基质细胞的培养524

三、骨髓基质干细胞体外分离和纯化525

四、骨髓基质干细胞的培养526

五、MSCs向骨组织的定向诱导分化527

六、骨髓基质干细胞在骨组织工程中的应用研究527

第二节 骨、软骨细胞的培养528

一、软骨细胞的培养528

二、小鼠成骨细胞的培养529

第三节 骨髓与外周血中树突状细胞的培养530

一、树突状细胞的起源和发育530

二、树突状细胞在免疫反应中的作用与地位531

三、以树突状细胞作为肿瘤疫苗研究的现状532

四、树突状细胞的分离、诱导与实验室培养533

五、分离诱导培养DC的方法535

第一节　器官培养在发育生物学的应用537

一、器官培养的条件537

第十六章　组织重组与器官培养537

二、部分器官的器官培养538

三、全胚胎的器官培养539

四、组织相互作用分析中的器官培养：牙胚模型542

第二节　胶原凝胶中组织的重建544

一、简介544

五、器官培养的限制544

二、主要试剂材料545

三、组织分解与胶原制备546

四、将组织植入三维胶原凝胶546

五、检测分析547

六、注意事项548

附录1 主要参考文献551

附录2 英汉词汇对照569