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目录1

第一章 双向电泳概述1

第一节 双向电泳的概念和原理1

第二节 双向电泳技术概述2

一、等电聚焦（IEF）2

二、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）6

第三节 蛋白质样品制备7

一、组织细胞破碎方法8

二、组织细胞裂解变性缓冲液8

三、分步提取（Sequential extraction）缓冲液12

四、应用组织细胞裂解液需要注意的问题13

第四节 双向电泳的优势、局限性及应用13

第五节 建立IPG-DALT双向电泳需要考虑的问题14

第二章 蛋白质样品制备15

第一节 实验材料、仪器和试剂15

一、实验材料15

二、实验仪器与设备15

三、实验试剂16

第二节 不同实验材料蛋白质提取方法17

一、SKOV3细胞蛋白质提取17

四、实验用酶类、分子量标准和试剂盒17

二、血清样品18

三、组织样品蛋白提取18

第三节 蛋白质浓度测定20

一、实验过程20

二、实验结果21

第四节 糖蛋白处理对策22

一、概述22

第五节 蛋白质样品SDS-PAGE检测23

一、灌制SDS聚丙烯酰胺凝胶（垂直平板电泳）23

二、实验步骤23

二、SDS-PAGE过程26

三、蛋白质检测27

四、凝胶干燥27

五、电泳结果29

六、讨论31

第三章 IPG-Dalt双向电泳之第一向——IPG等电聚焦32

第一节 仪器设备32

一、IEF仪器及配件32

二、溶液配制33

一、实验耗材和试剂33

第二节 实验耗材、试剂及溶液配制33

二、常规仪器33

第三节 IPG胶条溶胀34

一、IPG胶条溶胀（不含样品）34

二、IPG胶条溶胀（含样品）36

第四节 IEF实验操作36

一、IEF产品盒组装36

二、IEF程序及参数设置41

三、实验过程45

二、平衡缓冲液配制（参见附录T、U）45

一、器材和试剂45

第一节 IPG胶条平衡45

第四章 IPG-Dalt双向电泳之第二向——SDS-PAGE45

第二节 SDS-PAGE实验操作——垂直板SDS-PAGE系统46

一、北京六一仪器厂电泳系统46

二、Amersham Biosciences公司垂直电泳系统48

第三节 SDS-PAGE实验操作——MultiphorⅡ水平SDS-PAGE系统50

一、灌胶模具（瑞典Amersham Biosciences公司）50

二、模具组装50

三、灌制凝胶50

四、电泳操作过程52

第四节 蛋白质点检测和凝胶保存59

第五章 实验结果和讨论60

第一节 实验结果60

一、SKOV3细胞蛋白双向电泳结果60

二、血清样品双向电泳结果64

三、组织样品双向电泳结果67

第二节 讨论72

一、样品材料对双向电泳的影响72

二、不同的蛋白质提取方法比较73

四、IPG胶条pH范围和长度选择74

三、配基修饰蛋白检测74

五、上样方式比较75

六、垂直SDS-PAGE和水平SDS-PAGE比较76

七、不同浓度SDS凝胶对分离效果的影响78

八、两种交联剂对银染背景的影响78

九、水质对银染的影响79

第六章 故障及排除方法80

参考文献86

附录 储备液配制91