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Ⅰ 近年来酶组织化学研究技术的发展动向1

Ⅱ 基本技术7

1. 活性检测法7

1-1 检测法的选择8

1-2 固定(Fization)8

a. 固定液、固定温度的选择8

b. 固定方法和时间9

1-3 孵育反应所需切片的制作10

1-4 缓冲液的选择10

1-5 孵育(反应)11

a. 配制孵育液时的注意事项11

b. 孵育温度和时间11

c. 切片孵育法11

1-7 孵育后的操作12

1-6 研究反应特异性的对照实验12

1-8 人工产物13

2. 同功酶14

2-1 检测同功酶的方法15

a. 血清凝胶法15

b. 聚丙烯酰胺法16

3. 培养细胞的染色法18

a. 培养细胞的酶组织化学18

b. 培养的视网膜细胞的乙酰胆碱酯酶(ACHE)19

c. 单层培养以外的培养细胞染色法20

Ⅲ 氧化还原酶(Oxidoreductase)21

1. 琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase)21

a. 光学显微镜切片的SDH染色21

b. 电子显微镜用的SDH染色22

2. 乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase)25

a. 光学显微镜证明法27

b. 电子显微镜证明法28

3. 山梨醇脱氢酶(Sorbitol dehydrogenase)29

a. 组织化学的研究法29

b. 免疫组织化学的方法32

4. 乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase)(LDH)35

a. 酶组织化学(大鼠肝脏)35

b. 免疫组织化学38

5. 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phcsphate dehydrogenase)(G-6-PDH)41

6. β-羟基丁酸脱氢酶(β-Hydroxybutyrate dehydrogenase)43

7. 苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase)44

8. 异柠檬酸脱氢酶(Isocitrate dehydrogenase)45

9. 尿酸氧化酶(Urate oxidase)45

10. 葡萄糖氧化酶(Glueose oxidase)47

11. D-氨基酸氧化酶(D-Aminoacid oxidase)48

12. 烟酰胺腺嘌呤二核苷氧化酶(NAD(P)H oxidase)49

13. 细胞色素氧化酶(Cytochrome oxidase)52

14. 过氧化物酶(Peroxidase)57

15. 过氧化氢酶(Catalase)62

a. 酶的组织化学法(DAB法)62

b. 免疫组织化学法65

Ⅳ 转移酶(Transferase)67

1. 氨甲酰转移酶(Carbamoyl transferase)67

1-1 鸟氨酸氨甲酰转移酶(OCT)67

2. 谷-草转氨酶(Glutamic oxaloacetic transaminase, GOT)68

a. 金属盐法68

b. 偶氮色素法69

a. 偶氮色素法71

1-1 酯酶(羧酸酯水解酶，Carboxylic ester hydrolase)71

1-2 光镜的证明方法71

1. 酯酶(Esterase)71

Ⅴ 水解酶(Hydrolase)71

b. 吲哚酚(Indoxyl)法77

c. 用抑制剂及激活剂对非特异性酯酶的鉴别79

d. 胆碱酯酶和乙酰胆碱酯酶81

1-3 电镜的证明法82

a. 非特异性酯酶82

b. 乙酰胆碱酯酶、胆碱酯酶(Acetylcholinesterase, Cholinesterase)82

2. 磷酯酶(phospholipase)84

2-1 磷酯酶A(Phospholipase A)85

2-2 磷酯酶B(Phospholipase B)86

3. 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALPase)88

3-1 活性检测法88

a. 金属盐法89

b. 偶氮色素法91

3-2 同功酶(isoenzyme)93

3-3 免疫学方法101

4. 对硝基苯酚磷酸酶(NPP酶P-Nitrophenyl phosphatase)103

4-1 NPP酶的种类103

4-2 哇巴因敏感，K+依赖性P-NPP酶(K+-NPP酶，Ouabain-sensitive,K+-dependent P-nitrophenyl phosphatase)104

4-3 酸性对硝基苯酚磷酸酶(酸性NPP酶)107

4-4 H+-K+-ATP酶108

5. 辅酶A磷酸酶(CoA phosphatase)109

6. 酸性磷酸酶(Acid phosphatase)110

6-1 活性检测法110

a. 金属盐法(Gomori法)111

b. 偶氮色素法114

6-2 免疫学方法115

7. 葡萄糖-6-磷酸酶(Glucose-6-phosphatase)118

8. 果糖-1，6-二磷酸酶(Fructose-1,6-diphosphatase)123

a. 果糖-1.6-二磷酸酶的检测法(磷酸捕捉法)124

b. 果糖-1.6-二磷酸酶(三步法)125

9. 3＇，5＇-环核苷酸磷酸二酯酶(Cyclic 3＇，5＇-nucleotide phosphodiesterase)126

［内源性5＇-核苷酸酶应用法］128

10. 5＇-核苷酸酶(5＇-Nucleotidase)132

11. 硫胺素单磷酸酶(Thiamine monophosphatase)(TMP酶)136

12. 硫胺素焦磷酸酶(Thiamine pyrophosphataseTPP酶)137

13. 硫胺素三磷酸酶(Thiamine triphosphatase简称TPP酶)138

14. 腺苷三磷酸酶(Adenosine triphosphatase简称ATP酶)140

14-1 Mg2+-腺苷三磷酸酶(Mg2+-ATP酶)140

14-2 Na+-K+-腺苷三磷酸酶(Na+-K+-ATP酶)142

14-3 Ca2+ATP酶(Ca2+-adenosine Triphosphatase)144

15. 硫酸酯酶(Sulfatase)147

16. 腺苷酸环化酶和鸟苷酸环化酶(Adenylate cyclase和Guanylate cyclase)150

17. 氨基肽酶(Aminopeptidase)153

17-1 氨基肽酶M(Aminopeptidase M)154

17-2 二肽(氨基)肽酶Ⅳ［Dipeptidyl (amino)peptidase Ⅳ］156

17-3 二肽(氨基)肽酶Ⅱ［Dipeptidyl(amino)peptidase Ⅱ］156

18. 胰蛋白酶及其它157

18-1 胰蛋白酶(Trypsinenzyme),类胰蛋白酶(Trypsin-like enzyme)157

18-2 肠肽酶(Enteropeptidase)158

18-3 胰蛋白酶原(Trypsinogen)158

19. 脂蛋白酶(Esteroprotease)164

a. 酶谱164

b. 酶组织化学166

Ⅵ 裂解酶(Lyase)167

1. 醛缩酶(Aldolase)167

2. 柠檬酸合成酶(Citrate synthase)168

3. 碳酸酐酶(Carbonic anhydrase)169

Ⅶ 混合-功能氧化酶(Mixed-function oxidase)173

跋174