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第一篇 常用分子生物学实验技术及原理3

第一章 载体3

第二章 工具酶13

第三章 电泳22

第四章 真核生物基因组文库的构建29

第五章cDNA文库的构建33

第六章PCR基因扩增39

第七章 克隆化 DNA的定点突变45

第八章DNA序列测定54

第九章 基因表达63

第十章 印迹法及分子检测69

第十一章 实时荧光定量PC R技术75

第二篇 学生实验85

实验一 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA的转化85

实验二 质粒DNA的提取及其定性定量分析88

实验三 琼脂糖凝胶电泳检测DNA92

实验四PC R基因扩增及产物的回收96

附 扩增片段的全序列99

实验五DNA重组101

实验六 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达及检测107

Ⅰ外源基因在大肠杆菌中的诱导表达107

Ⅱ活性分析检测表达蛋白109

ⅢSDS-PAGE检测表达蛋白110

实验七 蛋白质印迹114

附 小鼠腹水多克隆抗体制备117

实验八 哺乳动物基因组DNA的分离及分析119

实验九 植物基因组DNA的提取123

实验十 大肠杆菌基因组DNA的提取126

实验十一 植物总RNA的提取129

实验十二RT - PCR（反转录-聚合酶链反应）133

附 β-微管蛋白编码序列135

实验十三 实时荧光定量PCR对小鼠脾细胞特定基因表达的分析137

实验十四 利用聚合酶链反应（PC R）定点突变142

实验十五 寡核苷酸介导的定点突变146

实验十六Southern杂交150

Ⅰ大肠杆菌基因组DNA Southern杂交150

Ⅱ小鼠肝基因组DNA Southern杂交155

实验十七 双脱氧链终止法测定DNA序列159

实验十八DNA核苷酸序列分析——银染色法164

实验室仪器操作技术169

实验设计选录169

分子克隆经验小结169

附录171

一、常用核酸、蛋白质换算数据171

二、氨基酸符号及相应密码子172

三、常见市售酸碱的浓度172

四、离心机转速与相对离心力的换算173

五、常用电泳缓冲液及凝胶加样缓冲液175

六、常用限制酶酶切位点及缓冲液178

七、分子生物学常用试剂和缓冲液的配制179

八、常用细菌培养基和抗生素溶液182

九、X射线底片的冲洗方法185

十、溴化乙锭溶液的净化处理186