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前言1

第一章 概述1

第二章 浸没固定4

2.1 藻类(新鲜的淡水藻)4

2.2 海藻类(单细胞海藻)5

2.3 细菌5

2.4 细菌7

2.5 骨(脱钙的)7

2.6 心肌8

2.7 软骨(未经脱钙的)9

2.8 单层培养细胞10

2.9 染色体11

2.10 纤毛虫12

2.11 卵子与合子13

2.12 胚胎14

2.13 眼睛15

2.14 具鞭毛的微生物15

2.15 游离细胞16

2.17 叶片(原位固定)17

2.16 叶17

2.18 肝18

2.19 肥大细胞19

2.20 神经19

2.21 神经元(高锰酸钾固定)20

2.22 神经元(戊二醛和四氧化锇)21

2.23 花粉粒21

2.24 花粉粒(连同花药)22

2.26 种子23

2.25 根23

2.27 皮肤24

2.28 粘液霉菌25

2.29 精细胞25

2.30 精子(人或动物的精液)26

2.31 精子27

2.32 牙齿(经脱钙的)28

2.33 木材(包含有形成层的)30

2.34 酵母菌31

第三章 微管灌注固定32

3.1 一般方法32

3.2 中枢神经系统33

3.3 心脏36

3.4 肾38

3.5 肝脏39

3.6 肺40

3.7 肌肉(大鼠后肢骨骼肌)43

第四章 细胞和细胞器的分离与固定45

4.1 刷状缘45

4.2 高尔基体47

4.3 分离的肝细胞48

4.4 微体49

4.5 微体(光滑或粗糙的)50

4.6 线粒体(植物的)51

4.7 细胞核52

4.8 细胞核53

4.9 细胞核(最幼小的)54

4.10 原生质膜56

4.11 核糖体(游离的)58

第五章 包埋59

5.1 脱水、渗透及聚合的常规方法59

5.2.2 低粘度环氧树脂60

5.2 包埋剂配方60

5.2.1 Araldite60

5.2.3 Durcupan61

5.2.4 Epon81262

5.2.5 GMA(Glycole Methacrylate)62

5.2.6 Maraglas63

(2)Epon-DER73664

(3)DER 332-DER 73264

(1)Epon-Araldite64

5.2.7 混合树脂64

(4)Epon-聚硫橡胶LP-8(Thiokol LP-8)65

(5)异丁烯酸—苯乙烯(Methacrylate-Styrene)65

5.2.8 Rigolac66

5.2.9 Spurr混合液66

5.2.10 vestopal66

第六章 快速固定与包埋67

6.1 动物组织67

6.2 植物组织68

7.2.1 戊二醛—卡巴肼混合物69

7.2 氨基塑料69

7.1 乙醇—Epon69

第七章 保存脂类的特殊包埋69

7.2.2 戊二醛—尿素70

7.2.3 戊二醛—尿素—乙二醇甲基丙烯酸酯（GMA）共聚体71

第八章 切片72

8.1 超薄切片的干涉色与切片的厚度72

8.2 切片程序72

8.2.1 材料、工具72

8.2.2 方法73

8.3 切片缺陷及补救办法74

8.4 冷冻切片81

8.4.1 动物或病理组织(经过固定的)81

8.4.2 动物组织(未经固定的)81

8.4.3 植物组织(经过固定的)82

8.4.4 植物组织(未经固定的)83

第九章 厚切片的染色84

9.1 用于植物组织的天青B84

9.2 天青B—亚甲兰84

9.3 硷性品红—亚甲兰85

9.4 苏木精—焰红B86

10.1 Alcian兰(爱尔新兰)88

10.2 铋88

第十章 染色88

10.3 碘化铋89

10.4 铟89

10.5 碘90

10.6 铁90

10.7 镧91

10.8.2 醋酸铅92

10.8.3 柠檬酸铅92

10.8.1 醋酸铅92

10.8 铅92

10.8.4 柠檬酸铅93

10.8.5 柠檬酸铅94

10.8.6 氢氧化铅94

10.8.7 氢氧化铅94

10.8.8 氢氧化铅95

10.8.9 酒石酸铅96

10.9 四氧化锇96

10.12 钌红97

10.11 高锰酸钾97

10.10 磷钨酸97

10.13 银98

10.13.1 高碘酸—银98

10.13.2 高碘酸—铬酸—银99

10.14 钍99

10.15 醋酸双氧铀100

10.16 醋酸双氧铀100

10.17 钒101

11.1 病毒和噬菌体102

第十一章 负染色102

11.2 细菌103

11.3 细菌片断103

第十二章 普通细胞化学104

12.1 酸、碱基团104

12.2 羟基104

12.3 核酸(一般的)106

12.3.1 三氯化铟106

12.3.2 钨酸钠106

12.4 DNA107

12.4.1 Feulgen—六亚甲四胺银法107

12.3.3 醋酸双氧铀法107

12.4.2 Feulgen—Schiff—乙醇铊法108

12.5 RNA110

12.6 蛋白质111

12.6.1 丙烯醛111

12.6.2 磷钨酸112

12.6.3 含硫氢基蛋白质113

12.6.4 碱性蛋白质113

12.7 碳水化合物114

12.7.1 过碘酸—六亚甲四胺银114

12.7.2 氨基硫脲—蛋白质酸银115

12.7.3 过碘酸—碱性铋116

12.8 酸性粘液117

12.8.1 甘油—氯化铁氨法117

12.8.2 胶体铁法117

12.8.3 胶体钍法118

12.9 脂类119

12.9.1 乙醇—Epon法119

12.9.2 戊二醛—卡巴肼法119

12.9.3 戊二醛—尿素法120

12.9.4 戊二醛—尿素—乙二醇甲基丙烯酸酯（GMA）共聚体法121

12.10.1 钠离子122

12.10 无机离子122

12.10.2 钙离子123

12.10.3 磷酸盐离子123

12.10.4 氯化物离子124

12.10.5 重金属离子124

第十三章 酶细胞化学方法126

13.1 酶细胞化学方法126

13.2 酸性水解酶128

13.2.1 酸性磷酸酶128

13.2.3 核苷酸二磷酯酶129

13.2.2 酸性单核苷酸酶129

13.2.4 硫酸酯酶130

13.3 ATP水解酶131

13.3.1 三磷酸腺苷酶131

13.3.2 腺苷酸环化酶132

13.4 其它磷酸酶133

13.4.1 碱性磷酸酶133

13.4.1.a 钙离子捕获133

13.4.1.b 胞苷—磷酸底物法134

13.4.1.c 枸橼酸盐螯合135

13.4.2 葡萄糖—6—磷酸酶136

13.4.3 硫胺素焦磷酸酶137

13.5 脂酶138

13.5.1 钙—胆酸钠138

13.5.2 铅—乙酰二硫化物139

13.6 过氧化物酶140

13.7 过氧化氢酶141

13.8 琥珀酸脱氢酶142

13.9 细胞色素氧化酶143

13.10 多酚氧化酶143

13.11 乙醇酸盐脱氢酶144

13.12 纤维素酶145

13.13 DOPA—氧化酶147

13.14 α—羟酸氧化酶147

13.15 递氢酶149

13.16 乳酸脱氢酶149

13.17 氨基肽酶150

13.18 γ—谷氨酰转肽酶152

13.19 转氨酶153

13.20 乌氨酸氨基甲酰转移酶154

14.1 免疫细胞化学方法常规处理程序156

第十四章 免疫细胞化学方法156

14.2.1 抗体片断158

14.2.1.a 单价Fab碎片158

14.2 抗体的分离提纯158

14.2.1.b F(ab＇)2碎片159

14.2.2 特异性抗体160

14.2.2.a 戊二醛直接交联法160

14.3.1 胶体金162

14.3.1.a 白磷还原162

14.3 标记物的制备162

14.2.2.b 蛋白A亲和层析法162

14.3.1.b 白磷还原163

14.3.1.c 抗坏血酸还原163

14.3.1.d 枸檬酸三钠还原法164

14.3.1.e 乙醇—超声波还原法164

14.3.1.f 硼氢化钠还原165

14.3.1.g 鞣酸—柠檬酸钠还原165

14.3.2 铁蛋白提纯166

14.4 抗体标记167

14.4.1 异源免疫球蛋白吸附法167

14.4.2 PAg法170

14.4.3.a 间苯二甲基二异氰酸盐(XC)171

14.4.3.b 甲苯2.4—二异氰酸盐(TC)171

14.4.3 铁蛋白标记抗体171

14.4.3.c 对,对＇二氟一间,间＇—二硝基二苯矾( FNPS)172

14.4.3.d 戊二醛偶联172

一步法172

两步法172

14.4.4 酶标记174

14.4.4.a 对,对＇二氟—间,间＇—二硝基二苯矾（FNPS）174

14.4.4.c 戊二醛两步法175

14.4.4.b 戊二醛一步法175

14.5 免疫细胞化学染色176

14.5.1 胶体金标记物176

14.5.1.a 环氧树脂超薄切片176

14.5.1.b 低粘度树脂包埋超薄切片177

14.5.1.c Low K4M快速包埋超薄切片178

14.5.1.d Low K4M包埋超薄切片179

14.5.1.e 冷冻超薄切片180

14.5.2 铁蛋白标记抗体的免疫电镜染色182

14.5.2.a 细胞表面或细胞外抗原182

14.5.1.f PAg染色法182

14.5.2.b 细胞内抗原183

〈1〉GMA包埋183

〈2〉BSA交联包埋184

〈3〉冷冻超薄切片185

14.5.2.c 亚细胞碎片186

14.5.2.d 组织培养细胞186

14.5.3 酶标记抗体187

14.5.3.a 细胞表面或细胞外187

14.5.2.e 病毒和大分子187

14.5.3.b 组织或细胞内抗原188

14.5.2.c 冷冻厚切片189

14.6 对照试验190

14.6.1 特异性抗体封闭190

14.6.2 特异性抗原吸收190

14.6.3 非特异性对照190

第十五章 放射自显影191

15.1 半薄切片191

15.2 超薄切片192

15.2.1 环套敷膜法192

15.2.2 平板法(平基法)193

15.2.3 孔膜法194

第十六章 分子生物学电镜实验技术195

16.1 蛋白质大分子的负染195

16.1.1 染色剂195

16.1.2 滴染法196

16.1.3 混染法196

16.2 核酸大分子铺展196

16.2.1 双链DNA和RNA197

16.2.3 单链RNA198

16.2.2 含单链区的DNA分子198

16.2.4 扩散法200

16.2.5 无蛋白质的铺展法200

16.3 核酸的变性与杂交201

16.3.1 部分变性202

16.3.2 DNA—DNA异源双链技术203

16.3.3 RNA—DNA杂交204

16.4 核酸与蛋白质的复合物205

16.4.1 蛋白质与双链DNA特异序列的结合205

16.4.2 蛋白质与单链RNA的特异序列的结合206

16.5.2 米勒法207

16.5.1 一步释放法207

16.5 染色质铺展207

16.6 原位杂交技术209

第十七章 金属投影与复型212

17.1 投影212

17.1.1 一次投影212

17.1.2 二次投影213

17.1.3 旋转投影214

17.1.4 铂—碳锥形投影214

17.2.2 二级复型215

17.2.1 一级复型215

17.2 复型215

17.3 冷冻断裂(蚀刻)复型216

第十八章 扫描电镜样品制备220

18.1 概述220

18.2 游离细胞222

18.3 柔软组织(动物)223

18.4 植物生长锥224

18.5 植物幼嫩组织(腋芽、花蕾)224

18.6 花药(幼嫩的)225

18.8 花粉(经自然干燥的)226

18.7 成熟含水分低的植物组织(木材、叶片)226

18.9 花粉(新鲜的)227

18.10 动物胚胎或软组织(含水分高的)227

18.11 动物单细胞(红细胞、白细胞)228

18.12 特殊干燥方法229

18.12.1 丙酮空气干燥229

18.12.2 乙醚冷冻干燥229

18.12.3 乙腈真空干燥229

18,12.4 冷冻干燥230

18.13 组织导电技术（TCT）230

18.15 冷冻树脂断裂法231

18.14 碘化钾—醋酸铅组织导电处理231

18.16 酶蚀刻法232

18.17 离子蚀刻233

附录234

附录Ⅰ 组织保存234

附录Ⅱ 缓冲液的配制235

附录Ⅲ 普通固定液的配制244

附录Ⅳ 戊二醛的纯化方法246

附录Ⅴ 硫赶醋酸的纯化方法247

主要参考文献248