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第一章 微生物学检查的基本技术1

实验一 细菌的形态检查1

一、显微镜油镜的使用及保护1

二、细菌不染色标本检查法3

三、细菌的染色法4

四、细菌的基本形态和特殊构造的观察7

实验二 细菌的人工培养法8

一、培养基的制备程序8

二、细菌的分离接种技术10

三、细菌的培养方法13

四、细菌的倾注培养和活菌计数15

五、细菌培养物性状的观察16

六、细菌的生化反应17

七、数字编码鉴定技术20

实验三 环境、体表细菌的检查和消毒灭菌试验22

一、空气中细菌的检测（沉降法）22

二、正常人体皮肤及随身物品细菌的检查23

三、鼻咽喉及口腔中细菌的检查24

四、热力杀菌试验24

五、紫外线杀菌试验27

六、滤器除菌试验28

七、常用化学消毒剂的杀菌试验30

八、噬菌体裂菌试验31

实验四 细菌遗传变异的相关试验32

一、细菌光滑型菌落与粗糙型菌落变异的证实32

二、细菌耐药性变异的证实33

三、抗生素及中草药敏感性试验34

四、自发突变选择学说的证实37

五、转座子诱变技术39

实验五 动物实验42

一、实验动物的选择与管理42

二、动物接种与采血技术43

三、肺炎链球菌小白鼠感染实验及感染细菌的检查45

四、透明质酸酶扩散实验47

五、内毒素的致热作用及内毒素检测48

六、破伤风外毒素的致病作用及抗毒素的保护作用49

第二章 常见细菌的培养鉴定51

实验六 病原性球菌51

一、病原性球菌的形态、染色性及培养特性51

二、葡萄球菌血浆凝固酶实验52

三、抗链球菌溶血素O测定53

四、肺炎链球菌胆汁溶解实验54

五、病原性球菌脓汁标本的检验55

实验七 肠道杆菌56

一、大肠埃希菌的分离与鉴定56

二、沙门菌属和志贺菌属的分离与鉴定58

三、肥达反应61

实验八 霍乱弧菌、空肠弯曲菌和幽门螺杆菌63

一、霍乱弧菌的培养与鉴定63

二、副溶血弧菌的培养与鉴定64

三、空肠弯曲菌的形态、染色性与培养特性65

四、幽门螺杆菌的形态、染色性与培养特性66

实验九 厌氧性细菌67

一、厌氧芽胞梭菌的形态、染色性及培养特性67

二、无芽胞厌氧菌的形态、染色性及培养特性68

三、破伤风外毒素与抗毒素中和试验69

四、产气荚膜梭菌动物试验69

五、临床标本厌氧菌的分离培养与鉴定69

实验十 分枝杆菌属70

一、结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌的形态、染色性及培养特性71

二、结核分枝杆菌的抗酸染色法71

三、结核分枝杆菌的荧光素染色法72

实验十一 棒状杆菌属74

一、白喉棒状杆菌的形态及染色特性75

二、白喉棒状杆菌的培养特性76

三、白喉棒状杆菌的毒力试验76

实验十二 动物源性细菌78

一、炭疽芽胞杆菌的形态染色78

二、炭疽芽胞杆菌的分离培养79

三、炭疽芽胞杆菌的串珠试验80

四、布鲁菌属的形态染色81

五、布鲁菌玻片凝集试验82

六、鼠疫耶尔森菌的形态染色83

实验十三 螺旋体83

一、病原性螺旋体的形态染色84

二、问号状钩端螺旋体的培养技术85

三、问号状钩端螺旋体的暗视野检查85

四、问号状钩端螺旋体显微镜凝集试验87

五、苍白密螺旋体苍白亚种（梅毒螺旋体）血清学试验88

实验十四 支原体92

一、肺炎支原体形态及菌落观察92

二、肺炎支原体冷凝集试验93

三、溶脲脲原体脲酶试验93

实验十五 衣原体94

一、沙眼衣原体包涵体的形态观察94

二、免疫荧光法检测沙眼衣原体95

三、ELISA法检测肺炎衣原体96

实验十六 立克次体96

一、立克次体的形态与染色97

二、外斐反应（Weil-Felix Reaction）97

实验十七 放线菌98

一、放线菌的“硫磺颗粒”检查98

二、放线菌的分离培养与生化鉴定99

第三章 真菌学实验102

实验十八 真菌的基本性状鉴定102

一、真菌形态结构的观察102

二、真菌小培养104

三、真菌的生化试验104

四、真菌的药敏试验105

实验十九 常见浅部真菌的鉴定106

一、真菌性皮屑镜检106

二、毛发穿孔试验107

实验二十 常见深部真菌的鉴定108

一、新生隐球菌墨汁负染色法108

二、白假丝酵母的鉴定试验108

第四章 病毒学实验111

实验二十一 病毒的分离培养111

一、病毒的动物接种法111

二、病毒的鸡胚接种法112

三、病毒的组织细胞培养法114

实验二十二 流行性感冒病毒的分离与鉴定116

一、流感病毒分离鉴定的程序与原则116

二、标本的收集处理和鸡胚接种117

三、尿液的收获118

四、血球凝集试验118

五、血球凝集抑制试验119

实验二十三 肠道病毒121

一、肠道病毒的分离鉴定121

二、轮状病毒的检测123

实验二十四 肝炎病毒126

一、ELISA法检测甲型肝炎病毒IgM抗体126

二、ELISA法检测乙型肝炎病毒表面抗原127

三、ELISA法检测乙型肝炎病毒核心抗体IgM128

四、PCR法检测HBV130

五、斑点杂交法检测HBV-DNA131

六、ELISA法检测丙型肝炎病毒IgM133

实验二十五 登革病毒134

一、斑计数法（plaque assay）测定登革病毒滴度134

二、登革病毒中和试验136

实验二十六 人类免疫缺陷病毒139

一、ELISA法检测HIV抗体筛选试验140

二、Western blot法检测HIV抗体确认试验142

第五章 微生物诊断新技术143

实验二十七 生物发光技术在微生物检测中的应用143

实验二十八 细菌核酸检测技术144

一、细菌基因组DNA的制备144

二、细菌DNA中（G+C）mol％的测定146

三、固相膜分子杂交147

四、菌落原位杂交149

五、DNA芯片技术150

六、多聚酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）151

实验二十九 16s rRNA基因PCR扩增序列分析与指纹图谱分析153

一、16s rRNA基因PCR扩增序列分析153

二、限制性片段长度多态性分析156

三、随机扩增DNA多态性分析157

四、单链构象多态性分析157

实验三十 细菌基因敲除技术159

一、鼠伤寒沙门菌lpp1和lpp2基因敲除载体的构建160

二、鼠伤寒沙门菌感受态细胞的制备及电穿孔转化162

三、基因敲除细菌的筛选和鉴定163

四、基因敲除鼠伤寒沙门菌和野生菌对T84肠上皮细胞侵袭能力的比较164

实验三十一 RNA干扰技术165

一、siRNA的设计和制备165

二、应用siRNA抑制流行性感冒病毒在宿主细胞内的复制167

附录169

附录一 实验室常用器材的处理与消毒灭菌169

附录二 常用染色液的配制方法170

附录三 细菌的染色法171

附录四 常用消毒液和清洁液的配制法175

附录五 常用试剂和溶液的配制法177

附录六 常用细菌培养基的制备法180

附录七 培养基pH的测定187

附录八 抗菌免疫血清的制备法188

附录九 常用细胞培养用液和培养基的配制190

附录十 微生物毒种的保存法193