基因组学与蛋白质组学实验技术及常见问题对策2025|PDF|Epub|mobi|kindle电子书版本百度云盘下载

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第一篇 基因组学研究常用实验方法第一章 核酸凝胶电泳及常见问题对策2

第一节 DNA琼脂糖凝胶电泳3

一、原理与分类3

二、仪器、材料与试剂4

三、操作步骤6

四、注意事项8

五、琼脂糖凝胶电泳常见问题及解决对策8

第二节 DNA的双向琼脂糖凝胶电泳技术14

一、原理与分类14

二、仪器、材料与试剂16

三、操作步骤16

四、注意事项19

第三节 RNA的变性琼脂糖凝胶检测20

一、原理与分类20

二、仪器、材料与试剂21

三、操作步骤22

四、注意事项23

第四节 DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳24

一、原理与分类24

二、仪器、材料与试剂26

三、操作步骤27

四、注意事项28

第五节 脉冲场凝胶电泳29

一、原理与分类29

二、仪器、材料与试剂30

三、操作步骤33

四、注意事项35

五、脉冲场电泳条件与影响因素36

附 凝胶的染色36

第二章 PCR、RT-PCR、PCR-SSCP、实时荧光定量PCR和DDRT-PCR实验技术及常见问题对策39

第一节 PCR技术40

一、原理与分类40

二、仪器、材料与试剂42

三、操作步骤43

四、注意事项44

五、PCR引物设计原则及影响PCR的因素44

六、PCR扩增中出现的问题及对策48

第二节 RT-PCR51

一、原理与分类51

二、仪器、材料与试剂53

三、操作步骤53

四、注意事项58

五、常见问题及对策59

第三节 PCR-SSCP61

一、原理与分类61

二、仪器、材料与试剂62

三、操作步骤63

四、注意事项65

第四节 实时荧光定量PCR方法66

一、原理与分类66

二、仪器、材料与试剂66

三、操作步骤67

第五节 DDRT-PCR74

一、原理与分类74

二、仪器、材料与试剂76

三、操作步骤76

四、注意事项83

第三章 分子杂交技术及常见问题对策84

第一节 原位杂交技术85

一、原理与分类85

二、仪器、材料与试剂86

三、操作步骤88

四、注意事项97

五、原位杂交常见问题的分析与对策98

第二节 缺口平移、多头引物与α-32P标记的探针制备101

一、原理101

二、仪器、材料与试剂102

三、操作步骤102

四、提高杂交特异性的对策107

第三节 Southern印迹杂交108

一、原理与分类108

二、仪器、材料与试剂110

三、操作步骤110

四、注意事项112

第四节 Northern印迹杂交114

一、原理与分类114

二、仪器、材料与试剂114

三、操作步骤115

四、注意事项117

第四章 基因组DNA与RNA的提取纯化及常见问题对策118

第一节 组织细胞基因组DNA的提取119

一、原理与分类119

二、仪器、材料与试剂119

三、操作步骤121

四、注意事项123

第二节 人全血细胞基因组DNA的提取124

一、原理与分类124

二、仪器、材料与试剂124

三、操作步骤125

四、注意事项126

五、基因组DNA提取常见问题及对策127

第三节 RNA提取和纯化127

一、原理与分类127

二、仪器、材料与试剂128

三、操作步骤128

四、注意事项131

第四节 mRNA提取纯化132

一、原理与分类132

二、仪器、材料与试剂132

三、操作步骤133

四、注意事项134

五、RNA提取中的常见问题及对策135

第五节 质粒DNA的提取140

一、原理与分类140

二、仪器、材料与试剂141

三、操作步骤（试剂盒法）142

四、注意事项143

第六节 超速离心提取质粒DNA144

一、原理与分类144

二、仪器、材料与试剂145

三、操作步骤146

四、注意事项149

第七节 噬菌体DNA的提取149

一、原理与分类149

二、仪器、材料与试剂150

三、操作步骤151

四、注意事项155

第八节 酵母DNA的提取155

一、原理与分类155

二、仪器、材料与试剂156

三、操作步骤157

四、注意事项159

第九节 分离酵母人工染色体159

一、原理与分类159

二、仪器、材料与试剂160

三、操作步骤161

四、注意事项162

第五章 DNA酶切与凝胶回收及常见问题对策163

第一节 DNA的限制性内切酶酶切技术164

一、原理与分类164

二、仪器、材料与试剂165

三、操作步骤165

四、注意事项166

五、提高酶切效率的对策168

第二节 双酶切DNA连接前的脱磷反应170

一、原理与分类170

二、仪器、材料与试剂171

三、操作步骤173

四、注意事项175

第三节 双酶切的缓冲液交换176

一、原理与分类176

二、仪器、材料与试剂178

三、操作步骤178

四、注意事项181

五、酶切反应与凝胶回收的常见问题及对策182

第六章 cDNA克隆与DNA序列分析方法及常见问题对策186

第一节 cDNA的合成和克隆187

一、原理与分类187

二、仪器、材料与试剂187

三、操作步骤190

四、注意事项197

第二节 λ gtll cDNA文库扩增及免疫法筛选197

一、原理与分类197

二、仪器、材料与试剂198

三、操作步骤199

四、注意事项202

第三节 DNA序列分析202

一、原理与分类202

二、仪器、材料与试剂204

三、操作步骤205

四、注意事项207

五、测序过程常见问题分析与对策208

第四节 DNA酶Ⅰ“足迹”法210

一、原理与分类210

二、仪器、材料与试剂211

三、操作步骤213

四、注意事项214

第二篇 蛋白质组学研究常用实验方法第七章 2-DE技术及主要影响因素与对策216

第一节 双向电泳技术217

一、原理与分类217

二、仪器、材料与试剂222

三、操作步骤223

四、注意事项234

五、IEF和SDS-PAGE的一些知识细解236

第二节 SDS-PAGE的染色245

一、原理与分类245

二、仪器、材料与试剂248

三、操作步骤249

四、注意事项253

第八章 2-DE样品制备及常见问题对策256

第一节 2-DE样品的制备257

一、原理与分类257

二、仪器、材料与试剂259

三、操作步骤及注意事项260

第二节 2-DE样品使用的试剂盒及可能影响成功的因素265

一、蛋白质组2-DE样品制备中的化学抽提试剂盒265

二、2-DE技术关键及可能影响成功的因素266

第九章 2-DE结果图像分析与图像的扫描、采点、量的分析及建立数据库269

第一节 2-DE图像结果分析及问题对策270

一、理想的2-DE结果图270

二、2-DE结果图常见问题实例分析及对策271

三、常见问题原因分析及解决对策287

第二节 凝胶图像的扫描、采点、量的分析及建立数据库296

一、图像采集与加工296

二、斑点检测298

三、斑点匹配299

四、数据分析及输出301

五、量的分析301

六、重复组301

七、归一化302

八、2-DE数据库的建立302

九、蛋白质的胶内酶切303

第十章 质谱分析及常见问题对策304

第一节 质谱技术305

一、原理与组成305

二、技术流程与鉴定蛋白质策略306

第二节 质谱分析307

一、质谱峰结果分析307

二、质谱图与结构解析309

三、质谱分析结果及常见问题对策312

第十一章 Western印迹及常见问题对策317

第一节 Western印迹技术318

一、原理与分类318

二、仪器、材料与试剂318

三、操作步骤320

四、注意事项324

第二节 银染色及Western印迹常见问题对策328

一、银染色操作步骤328

二、注意事项329

三、Western印迹常见问题对策329

四、一些Western印迹结果图331

第十二章 ELISA技术及常见问题对策333

第一节 ELISA技术333

一、原理与分类333

二、仪器、材料与试剂334

三、操作步骤336

四、注意事项343

五、ELISA技术的关键345

六、ELISA常见问题及处理对策350

第二节 免疫荧光技术及对细胞膜、细胞内蛋白质的检测356

一、原理与分类356

二、仪器、材料与试剂357

三、操作步骤358

四、注意事项360

第十三章 蛋白质相互作用组学分析技术361

第一节 Pull-down技术361

一、原理与分类361

二、仪器、材料与试剂362

三、操作步骤363

四、注意事项364

第二节 免疫共沉淀技术364

一、原理与分类364

二、仪器、材料与试剂365

三、操作步骤366

四、注意事项367

第三节 噬菌体展示技术368

一、原理与分类368

二、仪器、材料与试剂369

三、操作步骤370

四、注意事项373

第四节 酵母双杂交系统374

一、原理与分类374

二、仪器、材料与试剂375

三、操作步骤376

四、注意事项376

第五节 蛋白质芯片技术377

一、原理与分类377

二、仪器、材料与试剂378

三、操作步骤378

四、注意事项379

第六节 其他蛋白质相互作用组学分析的有关技术380

一、等离子共振技术380

二、荧光能量转移技术380

三、微阵列技术381