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第一章 恶性肿瘤发生的分子机制1

第一节 分子肿瘤学概述1

一、恶性肿瘤细胞的生物学特性1

二、恶性肿瘤发生的机制2

第二节 癌基因致癌的分子机制2

一、病毒癌基因2

二、细胞癌基因与病毒癌基因的关系5

三、原癌基因激活机制与肿瘤发生6

四、原癌基因表达产物及其分类10

第三节 抑癌基因及其抑癌基因的致癌机制11

一、抑癌基因11

二、抑癌基因的作用及各种抑癌基因的致癌机制11

三、抑癌基因改变的分子基础15

第四节 肿瘤恶性表型的其他相关基因15

第五节 研究恶性肿瘤分子机制的医学意义16

第二章 细胞凋亡及基因调控18

第一节 细胞凋亡的特征18

第二节 影响细胞凋亡的因素20

一、诱导细胞凋亡的因素或因子20

二、细胞生长因子去除后的细胞凋亡21

三、细胞凋亡的抑制22

第三节 细胞凋亡相关基因及其调控的分子机制23

一、ced基因家族23

二、bcl-2基因家族23

三、ICE家族24

四、其他基因与蛋白26

第四节 细胞凋亡实验常用的检测方法27

一、检测药物对肿瘤细胞的抑制效应的MTT法27

二、荧光法27

三、DNA琼脂糖凝胶电泳法27

四、透射电镜形态学观察法28

五、流式细胞仪检测法28

六、其他方法29

第五节 bcl-2凋亡基因表达的检测技术29

一、原理29

二、方法29

第六节 细胞凋亡的医学意义31

一、凋亡在发生学中的作用31

二、凋亡与疾病32

第三章 基因治疗的原理和策略33

第一节 基因治疗的概念及遵循原则33

第二节 基因治疗的程序33

一、目的基因的准备33

二、受体细胞（靶细胞）的选择和培养34

三、载体的选择34

四、目的基因导入靶细胞的基因转移方法34

第三节 基因治疗的策略37

一、缺陷基因的基因置换疗法37

二、基因修饰疗法37

三、基因失活疗法37

第四节 基因治疗的临床应用37

一、遗传病的基因治疗37

二、肿瘤的基因治疗38

三、抗病毒的基因治疗43

第五节 基因治疗的问题与前景44

一、基因治疗的问题44

二、基因治疗的前景44

第四章 肿瘤基因治疗的研究进展45

第一节 选择肿瘤基因治疗策略的原则及研究进展45

一、特异性基因治疗策略45

二、非特异性杀伤肿瘤细胞策略47

三、选择基因治疗策略的“三性”原则48

四、结论与展望49

第二节 肿瘤基因治疗靶基因选择的研究进展49

一、抑制癌基因的活性49

二、恢复抑癌基因活性50

三、抑制血管生成50

四、免疫基因治疗51

五、自杀基因疗法51

六、肿瘤多药耐药基因治疗51

七、目前肿瘤基因治疗研究面临的主要问题及展望52

第三节 生物类基因治疗载体的特性和选择的研究进展54

一、病毒载体55

二、细菌载体59

三、人工染色体载体59

第四节 基因治疗中非病毒载体的种类和基因导入方法60

一、介导DNA转移的物理方法60

二、阳性脂质体介导法62

三、阳离子多聚物介导法62

四、复合载体导入法63

五、抗体介导的基因转移64

六、新型纳米材料64

七、细胞转导肽介导的靶向基因传递系统65

第五节 siRNA和RNAi65

一、RNAi的发现过程65

二、RNAi机制66

三、dsRNA的构建66

四、RNAi的应用67

第六节 肿瘤基因治疗新思路68

一、肿瘤基因治疗的反思68

二、裂癌溶瘤病毒的应用69

参考文献72

第五章 人IL-24基因克隆、重组表达及抗肿瘤效应80

第一节 IL-24的发现及其生物学特性80

一、IL-24基因的结构及特点80

二、IL-24的生理生化特征81

三、IL-24受体82

四、IL-24信号转导82

五、IL-24的生物学作用82

六、前景展望83

第二节 IL-24基因治疗肿瘤机制84

一、IL-24与癌基因和抑癌基因84

二、IL-24与肿瘤细胞凋亡84

三、IL-24与血管内皮85

四、IL-24与信号传导85

五、IL-24与诱导细胞分化86

六、IL-24与细胞周期86

第三节 人IL-24基因克隆、重组表达86

一、人IL-24基因克隆和测序86

二、人IL-24基因与pBV220表达质粒的重组和在E.Coli中的表达87

三、人IL-24基因与pET-21a（＋）表达质粒的重组和在E.Coli中的表达88

四、人IL-24基因与pcDNA 3.0真核表达质粒的构建和表达及其抑瘤效应88

第四节 rhIL-24蛋白对黑色素瘤细胞的体内外抑瘤效应96

一、皮肤黑色素瘤的治疗96

二、rhIL-24蛋白对B16黑色素瘤细胞的体内外抑制作用98

三、rhIL-24蛋白对A375黑色素瘤细胞的体内外抑制作用101

第五节 rhIL-24蛋白对肺癌的抑瘤效应107

一、IL-24与肺癌107

二、rhIL-24对A549肺癌细胞的体内外抑制作用109

第六节 rhIL-24蛋白对胃癌的抑瘤效应113

一、rhIL-24蛋白对SGC7901胃癌细胞的体外抑制作用113

二、rhIL-24蛋白对胃癌细胞荷瘤裸鼠的体内抑瘤效应115

第七节 rhIL-24蛋白对Hela细胞的抑制作用119

第八节 rhIL-24蛋白对乳腺癌的体内抑瘤效应122

第九节 在原核细胞和CHO细胞中表达的rhIL-24蛋白的免疫刺激活性及血管形成抑制作用127

一、在原核细胞中表达的rhIL-24蛋白的免疫刺激活性检测127

二、在原核细胞中表达的rhIL-24蛋白抑制血管形成的功能127

三、在CHO细胞中表达的rhIL-24蛋白的免疫刺激功能128

四、在CHO细胞中表达的rhIL-24蛋白对血管形成的抑制作用128

参考文献130

第六章 hIL-24基因与腺病毒载体构建及抗肿瘤的基因治疗136

第一节 hIL-24基因与腺病毒载体的构建与鉴定137

一、hIL-24转移载体质粒的构建137

二、重组腺病毒载体构建138

三、重组病毒子的获得138

四、重组病毒子鉴定及效价测定138

第二节 Ad.hIL-24对肝癌细胞及其移植瘤的体内外的抑制作用及机制139

一、Ad.hIL-24对SMMC 7721肝癌细胞的体外生长抑制作用和诱导细胞凋亡的功能139

二、Ad.hIL-24对肝癌荷瘤裸鼠的体内抗瘤效应142

三、Ad.hIL-24对H22腹水型肝癌荷瘤小鼠的抑瘤效应和对免疫功能的影响146

第三节 Ad.hIL-24对胰腺癌细胞及其移植瘤的体内外抑制作用148

一、Ad.hIL-24对胰腺癌PATU8988细胞的体外抑制作用149

二、Ad.hIL-24抑制裸鼠体内肿瘤的生长151

第四节 Ad.hIL-24对Hep-2喉癌细胞的生长抑制及诱导细胞凋亡作用153

参考文献158

第七章 肿瘤生长抑制因子基因（ING4）的基因克隆和肿瘤基因治疗160

第一节 ING4基因的发现与作用机制160

一、ING4基因结构与定位160

二、ING4基因在肿瘤中的表达异常与突变160

三、ING4基因的作用机制161

第二节 ING4基因克隆、重组表达和抑瘤效应及机制163

一、ING4基因克隆和pcDNA3.0重组表达质粒的构建与鉴定163

二、ING4基因重组表达质粒对Hela细胞的抗肿瘤效应165

三、ING4基因重组表达质粒对肝癌细胞SMMC7721的抗肿瘤效应166

第三节 mING4基因腺病毒表达载体的构建和对肝癌细胞的抑制作用168

一、mING4基因腺病毒载体的构建168

二、mING4基因腺病毒载体对肝癌细胞的抑制作用170

第四节 Ad.(m→h)ING4对A549肺癌细胞体内外生长的抑制作用及机制172

一、mING4基因的人源化改造及腺病毒载体的构建172

二、Ad.(m→h)ING4对A549肺癌细胞生长的体外抑制作用及机制176

三、Ad.(m→h)ING4的体内抗肿瘤作用178

四、Ad.(m→h)ING4对A549肺癌细胞分泌VEGF和IL-6,IL-8的影响179

五、Ad.(m→h)ING4对A549肺癌细胞体外转移浸润及MMP-2,MMP-9表达的影响183

第五节 Ad.(m→h)ING4对K562白血病细胞凋亡的影响186

第六节 Ad.hING4诱导C6鼠胶质瘤细胞凋亡189

第七节 Ad.hING4对SGC7901人胃癌细胞的影响193

第八节 Ad.hING4诱导乳腺癌细胞的凋亡195

参考文献197

第八章 PTEN抑癌基因克隆、重组表达和基因治疗202

第一节 PTEN与肿瘤202

一、PTEN命名与结构202

二、PTEN的生物学功能203

三、PTEN的作用机制204

四、PTEN的突变与肿瘤的关系205

五、以PTEN为靶点的研究206

第二节 PTEN基因克隆和腺病毒载体构建及鉴定207

一、PTEN基因克隆207

二、重组腺病毒载体的构建及鉴定207

三、重组病毒子Ad.PTEN的包装及鉴定208

第三节 Ad.PTEN对A549肺癌细胞体内外生长的影响209

一、Ad.PTEN体外对A549肺癌细胞生长的影响209

二、Ad.PTEN对A549肺癌细胞荷瘤裸鼠的肿瘤抑制作用211

第四节 Ad.PTEN对A549肺癌细胞分泌VEGF和IL-6,IL-8的影响212

第五节 Ad.PTEN对ECV304细胞生长及分泌VEGF的影响215

参考文献217

第九章 E1A基因克隆和裂解型腺病毒载体构建及对肿瘤的基因治疗220

第一节 E1A与肿瘤220

一、E1A基因结构及功能220

二、E1A基因的抗肿瘤作用机制220

第二节 E1A基因克隆和裂解型腺病毒载体构建及鉴定222

一、E1A转移质粒的构建222

二、重组腺病毒质粒的获得222

三、重组病毒子的获得223

四、病毒效价的测定224

五、重组病毒子的鉴定224

第三节 rAd.E1A对肝癌细胞的体内外生长抑制作用及机制225

一、rAd.E1A对肝癌细胞的体外生长抑制作用及机制225

二、rAd.E1A对肝癌细胞的体内生长抑制作用及机制228

第四节 rAd.E1A对H22腹水型肝癌细胞荷瘤小鼠移植瘤的抑瘤效应及对免疫功能的影响232

第五节 rAd.E1A对ECV304人血管内皮细胞的影响234

参考文献236

第十章 IL-17F基因克隆、重组表达和基因治疗239

第一节 IL-17F的发现及生物学特性239

一、染色体定位和基因结构239

二、表达谱240

三、同源性分析和蛋白结构240

四、受体及信号传导241

五、主要生物学活性241

第二节 hIL-17F基因克隆及在大肠杆菌中的表达243

第三节 hIL-17F融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其生物学活性的研究246

一、GST-hIL-17F融合蛋白的表达246

二、GST-hIL-17F对ECV304细胞的生长抑制作用248

三、GST-hIL-17F对鸡胚绒毛尿囊膜血管形成的影响249

第四节 反转录病毒表达hIL-17F对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响250

参考文献257

第十一章 人VEGF发夹状核酶基因对肿瘤基因的治疗260

第一节 VEGF与肿瘤发生及其发夹状核酶抗肿瘤作用机制260

第二节 人VEGF发夹状核酶对肝癌细胞体内外抑瘤效应263

参考文献269

第十二章 人抑瘤素M基因（hOSM）表达和抑瘤效应271

第一节 抑瘤素M的生物学特性及作用机制271

第二节 hOSM基因克隆及在COS7细胞中瞬时表达273

第三节 hOSM基因在WI38细胞中的表达及其功能276

第四节 hOSM基因重组反转录病毒载体的构建及鉴定279

参考文献283

第十三章 干扰素λ1（IFN-λ1）和干扰素ε（IFN-ε）的抗肿瘤效应285

第一节 新型Ⅰ类干扰素285

一、干扰素的分类285

二、新型Ⅰ类干扰素的生物学特性285

三、Ⅰ类干扰素受体286

四、Ⅰ类干扰素信号传导通路287

五、新型Ⅰ类干扰素的功能287

第二节 hIFN-ε在CHO细胞中的表达及其生物学活性的研究289

第三节 hIFN-λ和hIFN-ε基因在WI38细胞中的表达及其活性比较292

参考文献296

第十四章 人白血病抑制因子基因（hLIF）表达的抗肿瘤效应298

第一节 白血病抑制因子298

一、LIF的结构及其作用机制298

二、LIF与胚胎干细胞299

三、LIF与造血系统299

四、LIF与神经系统300

五、LIF与骨骼改建300

六、LIF与内分泌系统301

七、LIF与HIV-1感染301

第二节 反转录病毒载体介导的hLIF基因真核稳定表达体系的建立302

第三节 rhLIF与hIL-24基因协同诱导HL60细胞的凋亡305

参考文献310

后记312