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第一章 核酸的分离与纯化1

第一节 核酸分离与纯化的技术路线与原则1

第二节 DNA的分离制备4

第三节 质粒的分离与纯化5

第四节 RNA的分离制备7

第五节 实验方法9

实验一 真核细胞染色体DNA的制备9

实验二 细菌的培养、保存和收集13

实验三 质粒DNA的提取16

实验四 组织和细胞总RNA提取（TRIzol法）19

实验五 核酸的定量21

第二章 蛋白质的分离与纯化25

第一节 生物材料的前处理25

第二节 蛋白质分离与纯化的方法26

第三节 蛋白质的鉴定29

第四节 实验方法30

实验一 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量30

实验二 Western印迹法检测表达蛋白34

实验三 免疫荧光法检测重组蛋白39

第三章 电泳技术42

第一节 概述42

第二节 电泳基本原理43

第三节 影响电泳迁移率的因素44

第四节 核酸电泳的指示剂与染色剂46

第五节 不同波长紫外线对EB-DNA复合物的影响47

第六节 实验方法48

实验一 琼脂糖凝胶电泳法检测DNA48

实验二 DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳50

第四章 DNA重组技术54

第一节 DNA限制性内切酶酶切技术54

第二节 DNA重组方法56

第三节 质粒的转化与细胞转染的方法58

第四节 DNA重组体的筛选与鉴定59

第五节 克隆化基因的表达61

第六节 实验方法62

实验一 DNA限制性内切酶消化法62

实验二 DNA分子的体外连接65

实验三 感受态细胞的制备69

实验四 细菌的转化71

实验五 重组质粒的α互补筛选74

第五章 核酸分子杂交77

第一节 核酸分子杂交基本原理及分类77

第二节 核酸分子杂交的基本方法79

第三节 探针的种类及标记81

第四节 核酸分子杂交84

第五节 杂交信号的检测85

第六节 实验方法87

实验一 地高辛标记DNA探针87

实验二 放射性核素32P随机引物延伸标记法88

实验三 Southern印迹杂交检测HBV-DNA91

实验四 Northern印迹杂交检测HCV-RNA95

第六章 聚合酶链反应（PCR）技术101

第一节 PCR的反应体系101

第二节 PCR的基本步骤103

第三节 PCR的衍生技术104

第四节 PCR技术在医学上的应用106

第五节 实验方法109

实验一 PCR检测病原体（试剂盒法）109

实验二 PCR检测遗传疾病的相关基因112

实验三 RT-PCR检测基因的表达116

第七章 蛋白质组学研究技术120

第一节 蛋白质组学概论120

第二节 细胞及亚细胞样品制备方法120

第三节 双向电泳技术123

第四节 蛋白质鉴定技术127

第五节 实验方法127

实验一 大肠埃希菌双向凝胶电泳图谱的建立127

实验二 真核酵母细胞双向图谱的建立132

第八章 生物芯片技术与应用137

第一节 生物芯片技术原理137

第二节 芯片的构建及操作流程138

第三节 芯片技术的应用140

第九章 细胞凋亡与检测技术142

第一节 细胞凋亡概述142

第二节 凋亡细胞的形态和生化特征及检测方法142

第三节 流式细胞术在细胞凋亡研究中的应用148

附录一 分子生物学实验室常用仪器的使用方法与保养154

附录二 实验用玻璃器皿的准备161

附录三 常用缓冲液的配制162

附录四 常用单位的换算163

附录五 常用DNA分子量标准参照物164

附录六 与DNA凝胶电泳有关的数据165