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第1篇 基础知识2

第1章 分子生物学实验室的基本要求2

1.1 实验室规则2

1.2 实验室安全防护2

1.3 放射性同位素防护4

1.4 危险化学试剂防护4

1.5 生物安全防护6

1.6 实验室物品与仪器的管理8

第2章 实验记录与实验报告9

2.1 实验记录9

2.2 实验报告10

第3章 仪器使用与溶液配制11

3.1 常用仪器设备11

3.2 溶液配制16

第4章 常用实验用品的处理17

4.1 清洗17

4.2 消毒灭菌18

4.3 液氮的安全使用19

第5章 分子生物学实验技术原理22

5.1 细胞培养技术22

5.2 大肠杆菌的培养与保存25

第2篇 核酸技术30

第6章 核酸电泳30

6.1 琼脂糖凝胶电泳分离DNA31

6.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离DNA36

第7章 核酸的分离纯化和鉴定40

7.1 质粒DNA的提取与纯化40

7.2 蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA44

7.3 其他DNA提取方案49

7.4 RNA的提取49

第8章 聚合酶链反应（PCR）61

8.1 普通PCR61

8.2 RT-PCR65

8.3 荧光定量PCR69

第9章 核酸分子杂交76

9.1 斑点杂交76

9.2 原位杂交80

9.3 Southern印迹杂交85

9.4 Northern印迹杂交90

第3篇 分子克隆96

第10章 DNA的酶切96

10.1 实验目的96

10.2 实验原理96

10.3 仪器、材料与试剂97

10.4 实验流程97

10.5 实验步骤97

10.6 结果分析98

10.7 注意事项99

10.8 应用99

第11章 DNA的连接101

11.1 实验目的101

11.2 实验原理101

11.3 仪器、材料与试剂102

11.4 实验流程102

11.5 实验步骤102

11.6 结果分析102

11.7 注意事项102

11.8 应用103

第12章 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化104

12.1 实验目的104

12.2 实验原理104

12.3 仪器、材料与试剂104

12.4 实验流程105

12.5 实验步骤105

12.6 结果分析106

12.7 注意事项106

12.8 应用107

第13章 重组子的鉴定110

13.1 实验目的110

13.2 实验原理110

13.3 仪器、材料与试剂110

13.4 实验流程110

13.5 实验步骤110

13.6 结果分析111

13.7 注意事项111

13.8 应用112

第4篇 蛋白技术118

第14章 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达118

14.1 实验目的118

14.2 实验原理118

14.3 仪器、材料与试剂119

14.4 实验流程120

14.5 实验步骤120

14.6 结果分析121

14.7 注意事项121

14.8 应用121

14.9 真核细胞表达外源基因操作步骤122

第15章 蛋白质的提取与纯化123

15.1 实验目的123

15.2 实验原理123

15.3 仪器与试剂124

15.4 实验流程125

15.5 实验步骤125

15.6 结果分析126

15.7 注意事项126

15.8 应用127

第16章 蛋白质的定量检测130

16.1 Lowry法测定蛋白质含量130

16.2 BCA法测定蛋白质含量132

16.3 Bradford法测定蛋白质含量134

第17章 目标蛋白质的测定137

17.1 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳137

17.2 蛋白质的免疫印迹技术（Western-Blot）141

17.3 免疫共沉淀146

17.4 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质150

第18章 基因工程菌的大规模培养及高密度发酵技术154

18.1 实验目的154

18.2 实验原理154

18.3 仪器与试剂155

18.4 实验流程156

18.5 实验步骤156

18.6 结果分析158

18.7 注意事项158

18.8 应用158

第5篇 生物信息学在分子生物学实验中的应用162

第19章 核酸和蛋白质序列的查询和分析162

19.1 核酸与蛋白质序列的数据库查询162

19.2 核酸与蛋白质序列的相似性分析169

第20章 常用的分子生物学分析软件175

20.1 多序列比对软件175

20.2 构建系统发育树软件181

20.3 引物设计软件188

第6篇 综合性实验194

第21章 综合性实验概述194

21.1 实验要求194

21.2 综合实验报告194

21.3 实验目的195

21.4 实验安排195

21.5 实验材料195

21.6 实验流程195

21.7 实验步骤195

第22章 综合性实验案例196

22.1 阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）196

22.2 katG基因全部缺失和点突变等引起结核菌产生对异烟肼（INH）的耐药研究198

22.3 亨廷顿舞蹈病（Huntington disease，HD）201

22.4 H7N9禽流感病203

22.5 神经营养因子（neurotrophic factors， NTFs）204

附录207

附录A 分子生物学实验中的常用数据及换算关系207

附录B 分子生物学实验中的常用试剂208

附录C 常用细菌培养基和抗生素溶液213

附录D 与分子生物学实验相关的实验资料214

参考文献216