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第一篇 生物化学实验技术概论3

第一章 生物化学制备方法3

第一节 生物化学制备方法的特点3

第二节 溶剂提取法4

第三节 沉淀法6

第四节 浓缩与干燥8

第五节 超临界流体萃取9

第六节 萃取与相分离10

第七节 结晶11

第二章 生物化学分离方法13

第一节 离心技术13

第二节 电泳技术20

第三节 层析技术40

第四节 膜分离技术简介50

第三章 生物化学分析方法52

第一节 质量分析法52

第二节 滴定分析法53

第三节 分光光度法55

第二篇 生物化学实验61

第四章 糖类61

实验一 植物组织中总糖和还原糖含量的测定——3,5-二硝基水杨酸法61

实验二 血糖的定量测定——Folin-Wu法64

实验三 肝糖原的提取和鉴定66

实验四 蒽酮比色定糖法68

实验五 粗纤维的测定——酸性洗涤剂法71

第五章 脂类73

实验六 植物叶片在衰老过程中过氧化脂质含量的变化73

实验七 血清胆固醇含量的测定——磷硫铁法74

实验八 血清甘油三酯含量的测定——乙酰丙酮显色法76

实验九 血清中游离脂肪酸含量的测定79

第六章 氨基酸和蛋白质82

实验十 甲醛滴定法测定氨基酸含量82

实验十一 双缩脲法测定蛋白质的浓度84

实验十二 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质的含量86

实验十三 Folin-酚试剂法蛋白质含量测定88

实验十四 紫外吸收法测定蛋白质含量90

实验十五 凝胶层析法分离血红蛋白92

实验十六 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳95

第七章 酶98

实验十七 影响酶促反应速度的因素98

实验十八 淀粉酶活力的测定102

实验十九 过氧化氢酶活力的测定105

实验二十 植酸酶活性的测定108

实验二十一 多酚氧化酶活性的测定110

实验二十二 蛋白酶活力的测定112

实验二十三 超氧化物歧化酶的分离提取115

第八章 核苷酸和核酸119

实验二十四 醋酸纤维素薄膜电泳分离核苷酸119

实验二十五 SDS法从动物组织中提取DNA121

实验二十六 CTAB法提取植物组织中的DNA122

实验二十七 浓盐法制备小牛胸腺DNA125

实验二十八 植物组织中DNA的制备127

实验二十九 Trizol法制备动物肝脏RNA129

实验三十 浓盐法提取酵母核糖核酸130

实验三十一 稀碱法提取酵母核糖核酸132

实验三十二 紫外吸收法测定核酸含量133

实验三十三 定磷法测定核酸含量135

实验三十四 二苯胺法测定DNA含量138

实验三十五 地衣酚法测定RNA含量140

第九章 维生素143

实验三十六 维生素A的定性测定143

实验三十七 维生素B1的定性测定144

实验三十八 维生素B2的定性测定146

实验三十九 维生素C的含量测定——2,6-二氯酚靛酚滴定法148

第十章 新陈代谢152

实验四十 糖酵解中间产物的鉴定152

实验四十一 脂肪酸β氧化——酮体的生成和测定154

实验四十二 转氨酶活性的测定157

第十一章 综合性实验160

实验四十三 植物过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳160

实验四十四 胃蛋白酶在水溶液和有机溶剂中的动力学测定163

实验四十五 菠萝蛋白酶的提取、初步纯化及活性测定169

实验四十六 Sephadex G-75分离纯化菠萝蛋白酶173

实验四十七 SDS-PAGE测定纯化的菠萝蛋白酶分子质量178

实验四十八 酵母蔗糖酶的提取及比活性的测定183

实验四十九 离子交换柱层析技术分离纯化蔗糖酶188

实验五十 蔗糖酶糖蛋白电泳技术194

实验五十一 植物胰蛋白酶抑制剂的提取及活性测定198

实验五十二 胰蛋白酶抑制剂的明胶-聚丙烯酰胺凝胶电泳203

实验五十三 动物组织LDH同工酶聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳206

实验五十四 动物组织LDH同工酶聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳211

实验五十五 3-磷酸甘油脱氢酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳214

实验五十六 等电聚焦法测定蛋白质的等电点218

实验五十七 尼龙固定化木瓜蛋白酶222

实验五十八 蛋白质双向凝胶电泳225

实验五十九 Western免疫印迹229

实验六十 PCR法克隆植物基因组DNA目的基因232

实验六十一 植物组织基因组RNA的提取及检测237

第十二章 基础分子生物学实验241

实验六十二 质粒DNA的分离和纯化241

实验六十三 琼脂糖凝胶电泳检测DNA243

实验六十四 限制性核酸内切酶酶切DNA244

实验六十五 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化245

实验六十六 目的基因的回收247

实验六十七 DNA分子的体外重组249

实验六十八 菌落PCR法筛选阳性重组子250

实验六十九 外源蛋白的诱导表达及SDS-PAGE检测252

附录256

一、一般化学试剂的分级256

二、实验室常用酸碱的相对密度和浓度256

三、常用酸碱指示剂257

四、常用缓冲溶液的配制方法257

五、pH计标准缓冲液的配制263

六、不同温度时标准缓冲液的pH264

七、硫酸铵饱和度的常用表264

八、层析法常用数据表266

九、某些蛋白质的物理性质270

十、常见蛋白质等电点参考值（pH）271

十一、化学元素的相对原子质量表272

十二、薄层层析分离各类物质常用的展层溶剂273

十三、各类物质常用的薄层显色剂275

十四、离心机转子的转速与相对离心力间的换算关系275

主要参考文献277