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第一篇 生物化学与介子生物学实验基本知识与理论1

第一部分 生物化学与分子生物学实验基本知识1

一、实验室基本规则1

二、实验室基本操作2

三、实验样品的制备6

四、实验误差与数据处理8

五、实验记录与实验报告12

第二部分 生物化学实验基本技术理论14

一、分光光度技术14

二、层析技术20

三、电泳技术37

四、离心技术43

第三部分 分子生物学实验基本技术理论48

一、重组DNA技术48

二、核酸分子杂交技术52

三、聚合酶链反应技术59

四、蛋白质印迹技术65

第四部分 生物化学与分子生物学专业常用数据库及其应用67

一、常用数据库67

二、常用分析工具74

三、真核基因启动子区生物信息学分析85

四、MicroRNA靶标的预测90

第二篇 生物化学与介子生物学实验揉作95

第五部分 生物化学实验操作95

实验一 蛋白质的性质95

实验二 蛋白质含量测定101

实验三 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白111

实验四SDS-PAGE蛋白电泳113

实验五 蛋白质双向电泳116

实验六 氨基酸与蛋白质层析119

实验七 肽或蛋白质N-端氨基酸残基序列测定126

实验八 核酸的分离提取、鉴定及含量测定134

实验九 双脱氧链末端合成终止法测定DNA序列137

实验十 酶反应条件的选择143

实验十一 酶活性测定148

实验十二 酶反应速度与米氏常数测定149

实验十三 血糖（葡萄糖）测定153

实验十四 脂类测定154

实验十五 代谢产物测定162

第六部分 分子生物学实验操作166

实验十六 质粒DNA的提取、酶切及电泳166

实验十七DNA片段的回收、连接与转化169

实验十八 重组子的转化与筛选172

实验十九 重组DNA在原核细胞中的表达175

实验二十 常规PCR及RT-PCR177

实验二十一 实时定量PCR（real-time PCR）181

实验二十二DNA的分子杂交——Southern印迹183

实验二十三RNA的分子杂交——Northern印迹187

实验二十四 蛋白质的免疫印迹——Western印迹190

实验二十五cDNA文库的构建191

实验二十六 荧光素酶报告基因检测启动子活性197

实验二十七 电泳迁移阻滞实验199

实验二十八 染色质免疫沉淀实验205

实验二十九 酵母双杂交实验210

实验三十RNA干扰实验214

附录220

附录1化学试剂分级与注意事项220

附录2常用缓冲液的配制221

附录3硫酸钱饱和度计算表228

附录4常用培养基及抗生素的配制230

附录5离心机转速（r/min）与相对离心力（RCF）的换算233