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第一章 抗体制备1

第一节 多克隆抗体的制备及鉴定1

一、抗原制备1

二、动物免疫2

三、抗体纯化及鉴定3

四、实验举例6

第二节 单克隆抗体的制备及鉴定7

一、单克隆抗体制备原理7

二、免疫方案7

三、细胞融合9

四、融合细胞的选择性培养11

五、单克隆细胞株的筛选与克隆化11

六、单克隆抗体鉴定13

七、单克隆抗体的大量制备16

八、单克隆抗体的纯化16

九、单克隆抗体制备的影响因素19

第二章 非放射性免疫标记技术21

第一节 酶免疫测定21

一、实验原理21

二、试剂与材料22

三、实验流程22

四、问题及解决策略23

第二节 免疫荧光23

第三节 免疫胶体金24

一、实验原理24

二、胶体金标记技术在免疫学中的应用24

三、应用举例25

第四节 化学发光26

一、化学发光原理26

二、化学发光免疫分析类型27

三、应用举例28

第三章 放射性标记技术30

第一节 放射性同位素标记抗原30

一、氯胺T标记法30

二、Iodogen标记法30

三、125I标记抗原的分离31

第二节 放射免疫分析技术31

一、实验原理31

二、主要技术条件32

第三节 免疫放射分析32

第四节 免疫细胞受体放射分析33

第五节 应用举例34

第四章 免疫细胞化学技术37

第一节 免疫细胞化学基本原理37

一、免疫细胞化学技术基本流程37

二、抗体的选择39

第二节 实验操作和常见问题41

一、细胞样本的制备41

二、固定42

三、免疫染色及检测43

第三节 免疫细胞化学的衍生技术45

第四节 应用举例46

第五章 T细胞表位的预测与鉴定49

第一节 细胞毒性T细胞表位的鉴定49

一、抗原特异性细胞毒性T细胞的获得49

二、抗原多肽片段的获得49

三、多肽亲和力测定50

四、效应性细胞毒性T细胞的体外诱导51

五、细胞毒性T细胞活性检测52

第二节 Th细胞表位的鉴定53

一、抗原特异性CD4+T细胞克隆的建立54

二、抗原多肽片段的获得54

三、肽结合实验54

四、肽特异性CD4+T细胞的诱导55

五、细胞增殖实验55

六、MHC限制性确定55

七、IFN-γ细胞因子分析55

第三节 MHC分型56

一、血清学方法56

二、聚合酶链反应-序列特异性引物法56

第四节 应用举例56

第六章 免疫印迹60

第一节 免疫印迹基本原理60

一、蛋白印迹60

二、DNA印迹60

三、RNA印迹61

第二节 蛋白质印迹实验流程61

一、蛋白质电泳分离61

二、蛋白质印迹63

三、免疫检测目的蛋白65

第三节 核酸印迹的免疫检测66

一、DNA印迹66

二、RNA印迹68

第四节 免疫印迹技术的应用68

第五节 应用举例69

第七章 免疫沉淀技术71

第一节 免疫沉淀与免疫共沉淀71

一、实验材料72

二、实验方法72

三、技术关键73

第二节 沉降技术75

一、实验方法75

二、技术关键75

第三节 串联亲和纯化技术76

一、实验材料76

二、实验方法77

三、技术关键78

第四节 DNA沉淀78

一、实验材料78

二、实验方法79

三、技术关键80

第五节 RNA结合蛋白免疫共沉淀80

一、实验试剂80

二、实验方法80

第八章 常用免疫细胞分离83

第一节 外周血单个核细胞的分离83

一、材料和仪器83

二、实验流程83

三、问题与解决策略84

第二节 T、B淋巴细胞及其亚群分离84

一、尼龙棉柱法富集T淋巴细胞84

二、补体介导细胞毒剔除B细胞及辅佐细胞富集T细胞85

三、通过补体细胞毒剔除T淋巴细胞或其亚群86

第三节 中性粒细胞分离86

一、材料和仪器86

二、实验流程86

第四节 小鼠骨髓造血干细胞及基质干细胞分离86

一、材料和仪器87

二、实验流程87

三、问题与解决策略87

第五节 免疫磁珠分选免疫细胞及其亚群87

一、材料和仪器88

二、实验流程88

三、问题与解决策略88

第九章 树突状细胞功能研究90

第一节 树突状细胞分离纯化90

一、小鼠脾脏树突状细胞的分离90

二、人外周血树突状细胞的分离91

第二节 树突状细胞的培养93

一、小鼠骨髓前体细胞培养树突状细胞93

二、人树突状细胞的培养93

第三节 树突状细胞表型和功能检测95

一、表型检测95

二、吞噬功能检测95

三、一氧化氮分泌能力检测96

四、细胞因子产生能力检测96

五、抗原提呈功能检测97

六、混合淋巴细胞反应97

第十章 T细胞亚群的诱导分化99

第一节 Th1和Th2细胞的分化诱导99

第二节 Th17细胞的诱导分化100

第三节 调节性T细胞的诱导分化101

第四节 滤泡辅助性T细胞的诱导分化102

第十一章 B淋巴细胞分离及功能检测104

第一节 B淋巴细胞的分离104

一、尼龙棉柱法分离B淋巴细胞104

二、T细胞清除法分离B淋巴细胞104

三、免疫磁珠法分离B淋巴细胞104

四、流式细胞术分选B淋巴细胞105

第二节 B细胞表型及初始和记忆性B细胞的检测105

一、B细胞的表型特征105

二、初始和记忆性B细胞的表型特征106

三、B细胞表型检测106

第三节 B细胞功能亚群的鉴定107

第四节 B淋巴细胞迁移的检测108

第五节 B淋巴细胞功能的检测108

一、B细胞的活化108

二、B细胞增殖的检测108

三、免疫球蛋白类别转换的诱导和检测109

第十二章 自然杀伤细胞功能检测111

第一节 自然杀伤细胞的分离纯化111

一、不连续密度梯度分离人外周血NK细胞111

二、补体裂解法分离小鼠脾脏NK细胞112

三、磁性细胞分选器分离112

第二节 自然杀伤细胞活性测定114

一、效应细胞的制备114

二、靶细胞的制备114

三、效-靶细胞作用及检测方法115

第三节 小鼠体内自然杀伤细胞清除119

第十三章 巨噬细胞功能检测121

一、小鼠腹腔巨噬细胞分离及纯化121

二、人血源性单核巨噬细胞的诱导及分离122

三、小鼠巨噬细胞极化的诱导及鉴定123

四、吞噬功能测定124

五、趋化功能测定125

六、体内活化巨噬细胞125

第十四章 母胎界面细胞分离培养127

第一节 人蜕膜免疫细胞的分离及纯化127

一、实验原理127

二、实验试剂与材料127

三、实验方法128

四、关键问题和解决策略129

第二节 人蜕膜基质细胞分离及培养129

一、实验原理129

二、实验试剂与材料129

三、实验方法130

四、关键问题和解决策略130

第三节 人绒毛外滋养细胞分离与培养130

一、实验原理130

二、实验试剂与材料130

三、实验方法131

四、关键问题和解决策略131

第十五章 流式细胞术132

第一节 流式细胞仪的原理132

一、流动室和液流驱动系统132

二、激光光源及光学系统132

三、检测信号的存储和放大系统133

四、检测结果的分析系统133

五、细胞分选系统134

第二节 流式细胞术的应用136

一、免疫细胞的表型分析136

二、免疫细胞的分选136

三、细胞内细胞因子的检测136

四、可溶性分子的检测136

五、细胞增殖检测137

六、其他应用138

第三节 应用实例139

一、小鼠胸腺细胞表面CD4及CD8分子检测139

二、小鼠脾脏淋巴细胞胞内IFN-γ检测140

三、CFSE标记法检测淋巴细胞增殖141

第十六章 免疫细胞增殖实验143

第一节 细胞培养与冻存143

一、细胞传代培养143

二、冻存与复苏143

第二节 细胞增殖检测144

一、直接计数法144

二、BrdU检测法145

三、荧光染料CFSE染色法检测细胞增殖146

四、3H-TdR掺入法146

五、噻唑蓝比色法146

第三节 T、B淋巴细胞增殖实验147

一、T淋巴细胞增殖实验147

二、B淋巴细胞增殖实验147

第四节 免疫相关细胞的增殖实验148

一、细胞因子依赖的细胞株增殖148

二、混合淋巴细胞培养148

三、细胞因子依赖的其他免疫细胞增殖148

第五节 三维细胞培养技术149

第六节 应用举例150

一、植物血凝素诱导T淋巴细胞增殖150

二、混合淋巴细胞培养150

第十七章 细胞毒实验技术152

第一节 补体依赖细胞毒实验152

第二节 细胞毒性T细胞功能测定153

一、效应细胞诱导和制备153

二、靶细胞的制备154

三、特异性抗原诱导的细胞毒性T细胞功能测定154

第三节 应用举例157

一、LDH法检测人外周血CTL细胞杀伤活性157

二、51Cr释放法检测人抗原特异性细胞毒性T细胞功能157

第十八章 免疫细胞吞噬功能测定159

第一节 单核巨噬细胞吞噬功能测定159

一、吞噬实验类型159

二、巨噬细胞的制备160

三、吞噬微粒的选择160

四、吞噬效率的测定161

第二节 中性粒细胞吞噬功能测定163

一、中性粒细胞的制备163

二、吞噬效率的测定163

第三节 应用举例163

一、巨噬细胞体内吞噬鸡红细胞实验163

二、中性粒细胞吞噬功能检测164

第十九章 免疫细胞凋亡166

第一节 细胞凋亡的形态学检测方法166

一、凋亡细胞直接观察166

二、苏木精-伊红染色法167

三、Hoechst 33258染色法168

第二节 细胞凋亡的生物化学研究方法169

一、凋亡细胞的DNA断裂检测169

二、免疫印迹检测凋亡信号转导分子170

第三节 流式细胞术检测细胞凋亡171

一、亚二倍体分析法171

二、Annexin V/PI双染法172

三、线粒体膜电位检测173

四、TUNEL法175

第二十章 细胞因子检测178

第一节 检测方法概述178

一、生物活性检测法178

二、免疫学检测法178

三、分子生物学检测法179

第二节 常见细胞因子生物学活性检测179

一、白细胞介素1生物学活性检测179

二、白细胞介素2生物学活性检测180

三、白细胞介素10生物学活性检测181

四、白细胞介素17生物学活性检测181

五、肿瘤坏死因子生物学活性检测182

第三节 细胞内细胞因子检测法182

第四节 可溶性细胞因子的蛋白定量检测184

一、酶联免疫吸附实验184

二、微量样本多指标流式蛋白定量技术184

三、Luminex-液相芯片分析系统185

第五节 ELISPOT技术186

第二十一章 光学成像技术在免疫学的应用189

第一节 活细胞成像技术189

一、荧光标记和检测189

二、图像数据采集和分析190

三、活细胞成像技术应用实例191

第二节 动物活体成像技术192

一、动物活体光学成像技术的原理192

二、动物活体光学成像系统的构成194

三、动物活体成像的操作流程194

四、动物活体成像在免疫学中的应用实例195

第二十二章 免疫相关动物模型建立198

一、炎症性肠道疾病动物模型198

二、I型超敏反应动物模型199

三、多发性硬化症动物模型200

四、类风湿关节炎动物模型202

第二十三章 经典免疫学实验204

第一节 凝集反应204

一、直接凝集反应204

二、间接凝集实验204

三、应用举例205

第二节 沉淀反应205

一、液体内沉淀反应205

二、凝胶内沉淀反应206

三、应用举例207

第三节 补体测定208

一、补体总活性测定208

二、脂质体均相免疫溶破实验210

三、补体旁路途径溶血活性的测定210

四、单个补体成分的测定211

第四节 循环免疫复合物的测定211

一、抗原特异性检测方法211

二、抗原非特异性检测方法211

第五节 B细胞溶血空斑实验213

一、琼脂溶血空斑法213

二、液相单层溶血空斑法214

附录：常用试剂配制及应用216

一、常用缓冲液、试剂的配制216

二、酶免疫检测常用试剂配制218

三、细胞相关试剂配制219

四、染色液配制220

五、固定剂221

六、蛋白电泳相关试剂221

七、淋巴细胞分离液222

八、其他试剂222