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第1篇总 论1

实验须知1

目 录1

第1章基本操作技术3

第1节玻璃器皿的清洗3

第2节吸量管的种类和使用4

第3节溶液的混匀、过滤及离心6

第4节实验样品的制备7

第5节分光光度法8

第1节电泳的基本原理15

第2章电泳技术15

第2节影响电泳的主要因素16

第3节区带电泳的分类17

第4节几种常见的电泳方法17

第5节二维电泳22

第3章层析技术28

第1节层析技术的分类28

第2节层析中的常用术语29

第3节纸层析31

第4节薄层层析33

第5节离子交换层析34

第6节凝胶层析36

第7节亲和层析39

第4章离心分离技术40

第1节离心分离技术的原理40

第2节离心机的分类与特点40

第5章印迹技术43

第1节Southern印迹43

第2节Northern印迹45

第3节斑点杂交46

第4节Western印迹46

第1节PCR技术概述48

第6章聚合酶链式反应48

第2节PCR技术的基本原理49

第3节PCR反应条件的优化51

第4节PCR技术的扩展54

第5节PCR中应注意的问题58

第6节PCR在医学中的应用60

第2篇各 论63

第7章蛋白质与氨基酸63

实验1蛋白质含量的测定63

实验2血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳定量测定68

实验3凝胶层析法分离血红蛋白和DNP-鱼精蛋白（或DNP-酪蛋白）74

实验4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量77

实验5蛋白质的沉淀反应82

实验6酪蛋白等电点的测定85

实验7氨基酸的薄层层析87

实验8 DNS-氨基酸聚酰胺薄膜双向层析89

第8章酶学……………………………………………………………………（93 ）实验9影响酶活性的因素93

实验10蔗糖酶的专一性95

实验11丙氨酸转氨酶活性的测定97

实验12乳酸脱氢酶同工酶的分离100

实验13转氨基反应102

实验14琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制105

实验15米氏常数的测定107

第9章糖、脂和生物氧化……………………………………………………（116 ）实验16饥饿和饱食对肝糖原含量的影响116

实验17脂蛋白的分离和提纯118

实验18血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳120

实验19血清三酰甘油测定122

实验20高密度脂蛋白中胆固醇含量测定125

实验21血清总胆固醇含量测定127

实验22乳酸测定129

实验23血中葡萄糖含量的测定134

实验24细胞核的分离和纯化138

第10章核酸138

实验25核酸含量的测定140

实验26酵母RNA的提取及组分鉴定145

实验27真核细胞基因组DNA的制备与定量147

实验28质粒DNA的提取、纯化和鉴定148

实验29 DNA的限制性酶切反应152

实验30大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA分子导入原核细胞154

实验31 Southern印迹158

实验32 Northern印迹164

实验33 PCR扩增技术169

实验34随机扩增多态性DNA技术170

第11章综合性实验173

实验35血清γ－球蛋白的分离及纯度鉴定173

实验36碱性磷酸酶的提取、比活性及Km值的测定175

实验37 Western印迹180

实验38 RT-PCR184

附：RQ-PCR186

实验39细菌双杂交质粒DNA的提取纯化及鉴定187

实验40 apoE基因多态性分析192

附录197

主要参考资料214