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第一部分 基本知识3

1光的基本知识3

1.1光的本质3

1.2光的性质4

1.3光的吸收5

2荧光的基本知识6

2.1荧光的发光原理6

2.2荧光色素的性质9

2.3组织细胞的自发荧光与继发荧光15

2.4荧光的淬灭及抗淬灭19

2.5荧光光谱交叉干扰及消除24

3荧光染料（色素）的早期应用和发展史27

3.1染料的早期应用和发展27

3.2荧光染料（色素）的早期应用和发展28

3.3荧光染料（探针）在活细胞中的早期应用和发展29

3.4荧光染料（探针）在植物研究中的早期应用和发展31

4常用的荧光染料（探针）34

4.1细胞器荧光探针34

4.2细胞骨架荧光探针40

4.3研究钙调节及活性的荧光探针44

4.4核酸荧光探针47

4.5其他荧光探针57

5活体荧光材料——绿色荧光蛋白（GFP）及其衍生物62

5.1绿色荧光蛋白的发现62

5.2绿色荧光蛋白的结构65

5.3绿色荧光蛋白的特性及优点66

5.4荧光蛋白的新进展68

6荧光蛋白的两大类新的衍生物——光诱导蛋白和双分子荧光互补技术72

6.1光诱导蛋白72

6.2双分子荧光互补技术79

7最新型荧光材料——量子点89

7.1量子点的定义及物理特性89

7.2量子点具有优良的光学特性91

7.3量子点的优点91

7.4量子点技术在生物领域中的应用92

7.5量子点技术的安全性95

7.6量子点技术的发展前景96

第二部分 荧光色素（探针）在细胞生物学中的应用99

8荧光技术在细胞凋亡研究中的应用99

8.1细胞凋亡及其基本通路101

8.2荧光显微镜对细胞凋亡的形态学观察104

8.3凋亡调控分子的荧光标记在细胞凋亡研究中的应用108

8.4其他荧光技术在细胞凋亡研究中的应用115

9流式细胞术在细胞生物学中的应用123

9.1检测细胞的特征123

9.2检测细胞的增殖和凋亡状态130

9.3定量检测可溶性蛋白质（CBA技术）135

9.4纯化特定的细胞139

10荧光在细胞骨架研究中的应用142

10.1荧光技术在微丝骨架研究中的应用143

10.2荧光技术在微管骨架研究中的应用153

11荧光原位杂交166

11.1荧光原位杂交的基本原理与基本过程166

11.2荧光原位杂交的应用182

12荧光在HER2/ErbB2/p185研究中的应用188

12.1用免疫荧光细胞化学的方法鉴定抗体与p185的结合特异性189

12.2 EGFP在ErbB2胞内区核定位信号研究中的应用191

13绿色荧光蛋白（GFP）在细胞分子生物学中的应用201

13.1绿色荧光蛋白（GFP）在动物细胞分子生物学中的应用202

13.2绿色荧光蛋白（GFP）在植物细胞分子生物学中的应用206

13.3绿色荧光蛋白在医学、新药的开发及其他方面的应用211

14免疫荧光细胞化学技术213

14.1免疫学基础知识214

14.2免疫荧光细胞化学的原理218

14.3荧光抗体的制备221

14.4免疫荧光组织化学细胞和组织标本的制备223

14.5免疫荧光细胞化学染色方法231

14.6非特异性染色的消除方法234

第三部分 常用荧光检测仪器241

15生物荧光显微镜241

15.1普通生物光学显微镜241

15.2生物荧光显微镜251

15.3细胞遗传工作站259

15.4光学显微镜的最新演变——无目镜倒置显微镜的诞生267

16激光扫描共聚焦显微镜272

16.1基本原理273

16.2主要部件275

16.3操作步骤及注意事项279

16.4主要用途282

16.5 LSM 510 META LSM710286

16.6应用于激光共聚焦的新技术290

16.7双光子（多光子）激光扫描显微镜292

16.8注意事项及维护保养294

17超高分辨率显微镜的原理和应用295

17.1分辨率295

17.2超高分辨率显微技术简介296

17.3超高分辨率显微镜的应用304

18活细胞显微成像技术307

18.1活细胞荧光工作站307

18.2其他活细胞显微成像技术313

19活体体内荧光成像技术329

19.1基本原理329

19.2基本组成331

19.3实验过程332

19.4系统特性333

19.5应用336

19.6发展前景338

20流式细胞仪339

20.1概述339

20.2工作原理与基本构成341

20.3主要用途345

20.4检测样品的制备348

20.5仪器的基本操作步骤349

20.6重要参数及意义352

20.7数据处理与分析355

21荧光定量PCR仪361

21.1概述361

21.2基本原理362

21.3仪器简介366

21.4样品制备及操作步骤370

22荧光分光光度计373

22.1基本结构与原理373

22.2 AMINCO-Bowman扫描荧光分光光度计374

22.3基本操作378

23激光扫描成像仪380

23.1系统硬件组成及功能380

23.2工作原理及操作步骤381

23.3仪器参数382

23.4荧光样品的制备382

附录 免疫细胞化学常用试剂及其配制方法384

F.1缓冲液384

F.2固定剂389

F.3黏附剂394

F.4封固剂395

F.5其他辅助试剂396

参考文献399