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第一篇 医学细胞生物学1

第一章 原代细胞培养1

第一节 基本知识1

一、原代培养的一般过程1

二、体外培养细胞的生长方式2

三、培养细胞生命期（Life Span of Culture Cells）3

四、每代细胞的生长过程4

第二节 培养用液5

一、细胞培养基和血清的选择5

二、培养基的介绍6

三、血清——天然细胞培养基7

四、培养基的配置8

五、其他常用液体的配置9

第三节 原代细胞基本培养技术和要领11

一、组织块贴壁法12

二、消化培养法13

第四节 细胞培养的污染及检测14

一、细胞污染的种类和判定14

二、微生物污染的排除16

第二章 传代细胞的培养18

第一节 基本知识18

一、基本概念18

二、建立细胞系（或株）的要求19

三、已建立细胞系或株的鉴定、管理和使用20

四、国内外的主要细胞库21

第二节 细胞培养液21

第三节 传代细胞的培养25

一、传代细胞的复苏25

二、细胞传代26

三、细胞的冻存26

第四节 传代细胞污染鉴定27

第三章 淋巴细胞分离培养28

第一节 基本知识28

一、淋巴细胞分离液与淋巴细胞的分离28

二、流式分选技术29

三、磁珠分离技术30

第二节 淋巴细胞分离液分离淋巴细胞30

一、原理31

二、材料和仪器31

三、实验方法31

四、结果分析35

第三节 流式细胞分选技术36

一、原理36

二、材料和仪器37

三、实验方法37

四、结果分析38

第四节 免疫磁珠法分离淋巴细胞38

一、原理38

二、材料和仪器41

三、实验方法41

四、结果分析41

第四章 细胞学实验43

一、细胞接种孔板的相关参数43

二、细胞培养板培养细胞操作中的注意事项44

第二节 细胞的增殖与抑制情况检测45

一、实验原理45

二、操作步骤45

三、细胞增殖和抑制实验中的试剂配制46

四、细胞增殖和抑制实验中对细胞的要求及细胞悬液的制备47

第三节 细胞计数方法48

一、传统细胞计数板进行计数的方法48

二、新兴的细胞计数仪对细胞进行计数的方法49

第四节 免疫组织化学技术54

一、免疫组织化学技术基本介绍54

二、免疫组织化学技术的具体操作步骤举例56

三、关于抗原修复相关问题57

四、细胞爬片和细胞涂片的制作及免疫细胞化学固定液的选择58

第五节 肿瘤细胞迁移、侵袭实验59

一、Transwell迁移及侵袭实验59

二、实验中所用结晶紫染料的配方63

第六节 肿瘤细胞黏附实验64

第五章 细胞凋亡的检测方法66

第一节 概述66

一、细胞凋亡的生物学功能67

二、细胞凋亡的生物学意义69

三、细胞凋亡与坏死的区别69

四、细胞凋亡的形态学特征69

五、细胞凋亡的分子机制70

第二节 TUNEL法检测凋亡71

一、原理71

二、材料和仪器72

三、实验方法73

四、结果分析74

第三节 Annexin V-FITC凋亡检测74

一、原理75

二、材料与仪器75

三、实验方法76

四、结果分析76

第四节 细胞周期与细胞凋亡77

一、原理77

二、材料与仪器78

三、实验方法78

四、结果分析79

第二篇 医学分子生物学80

第一章 基因工程80

第一节 基本知识80

一、基因工程的研究内容80

二、基因工程常用载体81

三、基因工程技术在医学中的应用86

第二节 原核表达载体系统88

一、原核细胞表达载体及特点88

二、大肠埃希菌表达系统90

第三节 真核表达载体系统96

一、真核细胞表达载体及特点96

二、真核细胞基因导入方法97

三、酵母表达系统98

四、哺乳动物细胞表达系统100

第四节 基因克隆102

一、目的基因DNA片段的分离103

二、目的基因DNA片段与载体的连接104

三、重组基因导入受体细胞106

四、重组DNA克隆的筛选与鉴定108

五、质粒DNA的扩增和抽提110

六、目的基因的表达112

第二章 基因转染117

第一节 基本知识117

一、磷酸钙共沉淀法117

二、电穿孔转染法121

三、脂质体介导DNA转染法125

四、逆转录病毒载体介导的DNA转染法128

第二节 瞬时转染和稳定转染132

一、瞬时转染133

二、稳定转染135

三、基因转染的主要应用140

第三章 基因转录水平的检测141

第一节 PCR和northern法技术概论141

第二节 逆转录PCR检测基因表达基本原理和分类141

一、PCR技术基本原理141

二、RT-PCR引物设计原则方法142

三、PCR反应条件的优化144

四、逆转录PCR147

二、实验器具的处理与准备148

三、试剂配制148

四、步骤148

五、PCR产物电泳结果分析155

第三节 实时荧光定量PCR方法简介157

一、实时荧光定量PCR的基本原理157

二、引物与探针的设计159

三、实时荧光定量PCR的步骤160

四、实时荧光定量PCR技术的应用160

第四节 Northern Blot法162

一、试剂准备163

二、操作步骤163

第四章 蛋白表达的检测166

第一节 Western blot检测蛋白表达166

一、基本原理166

二、仪器和材料、试剂的准备167

三、实验步骤169

四、背景信息175

五、Western Blot常见问题分析176

六、Western Blot的应用178

七、Western Blot实验中的小tip178

第五章 蛋白与DNA的相互作用181

第一节 概述181

第二节 凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）181

一、EMSA原理示意图182

二、EMSA实验过程示意图182

三、EMSA所用试剂的配制182

四、EMSA实验步骤184

五、结果分析188

第三节 染色体免疫共沉淀（ChIP）189

一、ChIP原理示意图189

二、ChIP所需试剂的配制190

三、ChIP实验步骤190

四、结果分析193

五、注意事项193

第四节 DNase Ⅰ足迹法（DNase Ⅰ foot printing）194

第五节 其他相关的实验技术和方法195

一、酵母单杂交技术（yeast one hybrid system）195

二、SELEX与核酸适体技术196

三、扫描探针显微镜技术197

四、生物质谱技术和表面等离子共振技术198

第六章 蛋白质与蛋白质相互作用检测199

第一节 概述199

第二节 酵母双杂交系统199

一、酵母双杂交系统原理199

二、酵母双杂交系统的实验步骤200

三、酵母双杂交系统的特点200

四、酵母双杂交系统的应用201

第三节 Pull-down检测201

一、Pull-down检测原理示意202

二、Pull-down检测所用标签蛋白及与相对应的亲和配体202

三、Pull-down检测实验步骤202

第四节 免疫共沉淀技术205

一、Co-IP原理示意图206

二、Co-IP所需试剂的配制206

三、Co-IP实验步骤207

四、Co-IP实验注意事项207

五、Co-IP的优点与不足208

第五节 其他相关的实验技术和方法209

一、噬菌体展示技术209

二、等离子共振技术209

三、荧光能量转移技术209

四、抗体与蛋白质阵列技术209

第七章 生物医学文献检索211

第一节 概述211

一、信息、知识、情报、文献和信息素养211

二、文献检索的基本知识212

三、计算机检索基本知识218

第二节 中文生物医学文献检索数据库220

一、中文文摘型数据库220

二、中文全文型数据库229

第三节 外文生物医学文献检索数据库236

一、外文文摘型数据库236

二、外文全文型数据库244

第四节 引文数据库254

一、Web of Science数据库254

二、《中文科技期刊数据库》（引文版）257

第五节 NCBI数据库260

一、概况260

二、数据库资源261

三、检索方法262