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目录1

第一章 绪论1

第一节 高效液相色谱法的特点1

一、与经典液相（柱）色谱法比较1

二、与气相色谱法比较2

三、高效液相色谱法的优点3

四、高效液相色谱方法发展简介3

第二节 高效液相色谱法的分类7

一、按溶质在两相分离过程的物理化学原理分类7

二、按溶质在色谱柱洗脱的动力学过程分类8

第三节 高效液相色谱法的应用范围和局限性9

一、应用范围9

二、方法的局限性9

参考文献10

第二章 高效液相色谱仪简介12

第一节 流动相及储液罐13

一、储液罐13

二、流动相脱气13

第二节 高压输液泵及梯度洗脱装置14

一、高压输液泵14

二、输液系统的辅助设备22

三、梯度洗脱装置23

第三节 进样装置26

一、停流进样装置26

二、六通阀进样装置27

三、自动进样器28

二、柱填料29

第四节 色谱柱29

一、柱材料及规格29

三、保护柱30

四、柱连接方式31

五、柱温控制31

第五节 检测器32

一、检测器的分类和响应特性32

二、紫外吸收检测器33

三、折光指数检测器36

四、电导检测器38

五、荧光检测器38

六、蒸发光散射检测器39

二、色谱工作站41

一、微处理机41

第六节 色谱数据处理装置41

参考文献44

第三章 液固色谱法和液液色谱法45

第一节 分离原理45

一、吸附系数45

二、分配系数46

第二节 固定相47

一、液固色谱固定相47

二、液液色谱固定相57

第三节 流动相58

一、表征溶剂特性的重要参数59

二、液固和液液色谱的流动相66

一、溶质保留值的基本方程式67

第四节 二元溶剂体系中液固和液液色谱的保留规律67

二、液固色谱的保留值方程式68

三、液液色谱的保留值方程式68

参考文献69

第四章 键合相色谱法71

第一节 分离原理71

一、正相键合相色谱法的分离原理71

二、反相键合相色谱法的分离原理72

第二节 固定相73

一、键合固定相的制备及分类75

二、键合固定相的性质76

三、使用键合固定相应注意的问题79

一、溶剂的选择性分组82

第三节 流动相82

二、在键合相色谱中选择流动相的一般原则83

三、改善色谱分离选择性的方法85

四、多元混合溶剂的多重选择性87

五、溶质保留值随溶剂极性变化的一般保留规律89

六、用线性溶剂化自由能关系（LSER）来表征反相液相色谱中溶质的保留值方程式90

第四节 新型高效液相色谱的固定相和流动相91

一、新型高效化学键合固定相92

二、化学键合固定相分类方法简介97

三、整体色谱柱104

四、超热水流动相110

第五节 离子对色谱法113

一、分离原理114

二、固定相、流动相和对（反）离子114

三、影响离子对色谱分离选择性的因素117

参考文献119

第五章 梯度洗脱122

第一节 基本原理123

一、等度洗脱123

二、梯度洗脱124

第二节 影响梯度洗脱的各种因素126

一、梯度洗脱时间（tG）对分离的影响126

二、强洗脱溶剂组分B浓度变化范围的影响127

三、梯度陡度对保留值的影响129

四、柱温变化对保留值的影响129

五、梯度洗脱程序曲线形状的影响129

第三节 优化梯度洗脱的方法131

一、建立梯度洗脱方法的一般步骤131

六、影响梯度洗脱的其他变量131

二、梯度洗脱中的实验条件134

第四节 梯度洗脱的图示方法136

一、二元溶剂梯度洗脱136

二、三元溶剂梯度洗脱137

三、四元溶剂梯度洗脱139

四、用极坐标和球面坐标描述梯度洗脱141

参考文献143

第六章 体积排阻色谱法144

第一节 分离原理144

一、分布系数144

二、体积排阻色谱法的特点145

第二节 固定相146

一、固定相的分类146

二、凝胶固定相的特性参数150

三、凝胶色谱柱的制备及谱图特点153

第三节 流动相154

一、凝胶渗透色谱的流动相155

二、凝胶过滤色谱的流动相156

第四节 凝胶渗透色谱法测定聚合物分子量分布156

一、聚合物分子量、分子量分布及测定的意义156

二、凝胶渗透色谱图的解析及数据处理158

参考文献161

第七章 高效液相色谱法的基本理论162

第一节 表征液相色谱柱填充性能的重要参数163

一、总孔率163

二、柱压力降164

三、柱渗透率164

第二节 高效液相色谱的速率理论165

一、影响色谱峰形扩展的各种因素166

二、范第姆特方程式的表达及图示169

第三节 诺克斯方程式170

一、描述色谱柱性能的折合参数170

二、诺克斯方程式171

第四节 色谱柱操作参数的优化172

一、三个柱操作参数的表达式172

二、HPLC中实用柱操作参数的优化173

三、柱操作参数优化的图示表达方法176

第五节 “无限直径”效应和柱外效应181

一、“无限直径”效应181

二、柱外效应183

第六节 超高效液相色谱185

一、超高效液相色谱的理论基础186

二、实现超高效液相色谱的必要条件187

三、超高效液相色谱的应用192

参考文献194

第八章 高效液相色谱分离条件的优化195

第一节 高效液相色谱中色谱参数的相关性195

一、色谱参数的分类195

二、色谱参数的相关性196

第二节 色谱分离条件优化标准的选择197

一、难分离物质对的峰对分离优化标准197

二、整体色谱图的优化标准198

第三节 色谱响应函数和色谱优化函数200

一、Morgan和Deming提出的色谱响应函数200

二、Watson和Carr提出的色谱响应函数200

四、Berridge提出的色谱响应函数201

三、Glajch和Kirkland提出的色谱优化函数201

第四节 色谱分离条件的优化方法202

一、单纯形法203

二、窗图法205

三、混合液设计实验法208

四、重叠分离度图法211

五、等强度洗脱和梯度洗脱的优化图示法214

第五节 优化HPLC分离的计算机辅助方法218

一、实验设计系统218

二、人工智能系统221

第六节 高效液相色谱专家系统简介222

一、专家系统的组成222

二、专家系统的使用方法223

参考文献224

第九章 微柱液相色谱法226

第一节 方法简介226

一、微型柱的分类227

二、微柱液相色谱法的优点和缺点228

第二节 基本理论229

一、柱外效应229

二、管壁效应232

三、稀释效应234

四、分离阻抗234

第三节 仪器装置235

一、输液泵系统236

二、进样系统238

三、柱系统241

四、检测器系统243

五、连接管和接头245

第四节 微柱的制备247

一、评价微柱性能的重要参数247

二、影响微柱分离效率的相关参数248

三、微柱的制备方法249

第五节 微柱液相色谱的新技术255

一、纳米液相色谱技术255

二、超高压液相色谱技术263

参考文献270

第十章 二维高效液相色谱法273

第一节 描述分离体系效能的参数273

一、峰容量273

二、信息量275

第二节 二维高效液相色谱的技术功能276

一、切割功能277

二、反冲洗脱功能278

三、痕量组分的富集功能278

第三节 二维高效液相色谱的流路系统278

一、多通路切换阀278

二、二维高效液相色谱的流路系统279

第四节 二维高效液相色谱在蛋白质组学研究中的应用286

参考文献297

第十一章 建立高效液相色谱分析方法的一般步骤和实验技术299

第一节 样品的性质及柱分离模式的选择300

一、样品的溶解度300

二、样品的分子量范围301

三、样品的分子结构和分析特性301

一、容量因子和死时间的测量307

第二节 分离操作条件的选择307

二、色谱柱操作参数的选择308

三、样品组分保留值和容量因子的选择309

四、相邻组分的选择性系数和分离度的选择309

第三节 高效液相色谱法的实验技术310

一、溶剂的纯化技术311

二、色谱柱的装填技术311

三、色谱柱的平衡、保护与清洗、再生技术315

四、梯度洗脱技术320

五、色谱柱前和柱后的衍生化技术321

六、样品的预处理技术324

参考文献329

符号表331