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Ⅰ免疫荧光技术的基本知识1

一、免疫荧光技术发展的历史1

二、免疫光荧技术的原理和方法1

<一>原理1

<二>方法，2

1、直接法2

2、间接法2

3、补体法2

三、免疫荧光技术的特点4

<一>特异性4

<二>快速性4

<三>敏感性4

四、免疫光荧技术必备的条件4

<一>抗原4

<二>荧光抗体5

<三>荧光染料5

<四>仪器设备5

五、免疫荧光技术的程序6

六、免疫荧光技术在兽医科学的应用6

Ⅱ亚荧光抗体的制备7

一、高免血清的制备7

<一）免疫原7

1、免疫原的种类7

2、免疫原的制备8

<1>微生物抗原的制备8

<2>免疫球蛋白抗原制备8

<二>被免疫动物的选择8

<三>免疫的方法8

1、免疫途径8

2、佐剂的使用8

<1>弗氏佐剂抗原的制备8

<2>明矾佐剂的制备9

3、免疫原的用量9

<四）抗血清效价的测定9

1、环状沉淀试验测血清效价的方法9

2、用免疫荧光法测血清效价的方法10

<五>分离血清10

二、免疫球蛋白的提取及鉴定10

<一>免疫球蛋白的提取方法11

1、硫酸铵盐析法11

<1>盐析的方法步骤11

<2>盐析时注意事项12

<3>去除盐离子的方法12

①用葡聚糖凝胶去除盐离子的方法12

②透析法除盐的方法14

2、DEAE一纤维素离子交换层析法14

①DEAE一纤维素精提免疫球蛋白的原理14

②DEAE一纤维素的处理14

③DEAE一纤维素纯化免疫求蛋白的程序15

④DEAE一纤维素的再生15

3、试剂的配制15

<1>磷酸盐缓冲液<P、B、S>的配制15

<2>饱和硫酸铵的配制15

<3>20％磺酸水杨酸的配制16

<4>氯化钡溶液的配制16

<5>纳氏试剂的配制16

<6>P、B缓冲液的配制16

<二>免疫球蛋白的定量测定16

1、双缩尿法定氮的原理17

2、双缩尿法定氮的方法17

3、双缩尿试剂的配制18

<三>免疫球蛋白的鉴定18

1、区带电泳18

2、免疫电泳19

3试剂的配制19

三、标记荧光素20

<一>荧光素标记抗体的原理20

<二>标记的方法20

1、直接快速标记法20

2、透析标记法21

<三>标记抗体的纯化21

1、游离荧光素的去除21

<1>透析法去除FITC21

<2>葡聚糖凝胶过滤法去除FITC21

2、标记不适蛋白分子的去除22

<四>荧光抗体<FA>的鉴定22

1、F/P值的测定22

2、染色性能的鉴定23

<1>染色滴度的测定23

<2>特异性鉴定23

<五>记标抗体的保存23

<六>溶液的配制24

Щ染色标本的制备和染色方法24

一、标本的制备24

<一>载片的选择和处理24

<二>涂片和压印片的制法25

1、涂片25

2、压印片25

<三>组织切片25

1、冰冻切片25

2、石腊切片和碳蜡切片25

<四>单层培养细胞26

<五>标本的固定26

1、固定液的选择26

2、影响固定效果的因素26

3、固定的方法27

4、标本的保存27

二、染色方法27

<一>直接染色法27

<二>间接染色方法28

<三>补体染色法28

<四>对照染色问题29

三、结果判定29

<一>非特异性荧光29

1、自发荧光29

2、来自FA的非特异性荧光29

3、由于操作技术上的不当所引起的非特异性荧光30

<二>特异性荧光的特点30

1、细菌的特异性荧光的特点30

2、病毒的特异性荧光的特点30

3、原虫的特异性荧光30

<三>观察判定30

1、特异性的胞浆荧光的强度30

2、判定30

3、排除非特异性荧光的方法30

IV荧光显微镜31

一、荧光现象及其产生的理论简介31

二、荧光显微镜的构造和组成31

1、光原32

2、显微镜33

3、滤板33

三、荧光显微镜的使用和注意事项33

V荧光显微照像34

一、胶卷的选择34

二、土法荧光照像的方法35

三、荧光照像的注意事项36

Ⅵ免疫荧光应用凡例36

一、免疫荧光在细菌学中的应用36

例：布氏杆菌的荧光抗体诊断36

二、免疫荧光技术在病毒快述诊断中的应用37

例一：用小肠粘膜洗沉液涂片直接荧光抗体染色检出猪传染性胃肠炎38

例二：猪瘟荧光抗体的制备—部分采血快速标记直接测定荧光抗体效价的效果42

三、免疫荧光在寄生虫学中的应用47

例：弓形体的荧光抗体诊断47

附：透光度与光密密度换算表49