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第一章 绪论1

第一节 疾病的分子机理1

一、疾病的基因诊断3

二、疾病的基因治疗4

三、疾病的基因预防7

第二节 分子生物技术8

一、基因获取8

二、基因检测9

三、基因工程9

四、基因探测9

五、基因转移9

六、基因信息技术10

第三节 分子生物技术在现代医学发展中的意义10

一、分子生物学技术使临床思维方式不断更新11

二、分子生物学技术促进实验医学和经验医学的融合11

第二章 核酸技术13

第一节 核酸的提取与分离13

一、基因组DNA的提取与纯化13

二、RNA的提取和cDNA合成16

第二节 PCR技术26

一、PCR扩增反应的基本原理26

二、PCR扩增反应的实施34

第三节 核酸的电泳技术39

一、原理39

二、实验操作42

第三章 蛋白质技术45

第一节 概述45

一、蛋白质的研究历史45

二、蛋白质的理化性质和生物学特性45

第二节 蛋白质的提取和粗分离46

一、材料的预处理46

二、细胞的破碎49

三、蛋白质的沉淀53

四、蛋白质的浓缩57

第三节 层析法分离纯化蛋白质60

一、层析技术的原理及分类60

第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳67

一、聚丙烯酰胺凝胶电泳原理简介67

二、聚丙烯酰胺凝胶电泳的分类68

三、SDS-聚丙烯凝胶电泳的操作73

四、聚丙烯酰胺凝胶电泳的特点74

第五节 蛋白质分析75

一、蛋白质浓度测定的方法75

二、测定蛋白质纯度的方法78

三、测定蛋白质的活性79

第四章 分子杂交与印迹技术80

第一节 核酸杂交的基本理论80

一、DNA变性、复性与杂交80

第二节 常用印记杂交方法89

一、Southern印记杂交法89

二、Northern印记杂交法97

三、菌落原位杂交法102

四、斑点杂交法102

五、狭缝杂交法103

六、核酸原位杂交法103

七、Western印记杂交法107

第五章 重组DNA技术110

第一节 概述110

一、重组DNA技术基本步骤110

二、重组DNA技术研究的内容111

第二节 重组DNA操作需要的工具酶115

一、限制性核酸内切酶116

二、DNA聚合酶119

三、逆转录酶122

四、DNA连接酶123

五、其他DNA修饰酶124

第三节 克隆载体124

一、质粒载体125

二、噬菌体载体138

三、柯斯质粒138

四、人工染色体139

第四节 基因克隆的方法139

一、获得目的基因的方法139

二、选择和修饰克隆载体154

三、重组体的构建——目的基因与载体连接156

四、重组体向宿主细胞的导入160

五、含重组体的细菌菌落的筛选与鉴定164

六、重组体的表达169

第五节 重组DNA技术与分子医学171

一、疾病相关基因分析171

二、制造生物活性蛋白173

三、疾病的基因诊断与基因治疗174

第六章 细胞培养技术176

第一节 细胞培养的一般过程176

一、准备工作176

二、取材177

三、培养177

四、冻存及复苏178

五、常用仪器设备178

第二节 环境、培养器皿清洗消毒及使用178

一、清洗179

二、消毒和灭菌181

三、无菌室182

四、超净工作台183

第三节 细胞培养液183

一、细胞培养基的基本要求183

二、天然细胞培养基185

三、合成细胞培养基185

第四节 细胞培养的基本方法188

一、培养细胞的细胞生物学188

二、体外培养细胞的分型188

三、培养细胞的生长和增殖过程189

四、原代培养191

五、传代培养192

六、细胞的冻存与复苏193

第五节 细胞计数及活力测定197

一、原理197

二、仪器、用品与试剂197

三、操作步骤198

第六节 细胞运输的准备199

第七节 抗生素在培养基中的应用200

第八节 常见组织细胞的培养方法200

一、上皮细胞培养200

二、内皮细胞培养201

三、神经细胞培养202

四、肌组织细胞培养204

五、巨噬细胞培养205

六、肿瘤细胞的培养206

第七章 基因组学技术211

第一节 概述211

第二节 基因组学研究技术212

一、基因组作图212

二、新基因的分离（RACE）216

三、基因组测序技术219

四、基因定位技术222

五、功能基因组学224

六、比较基因组学231

七、基因芯片（gene chip）技术233

第三节 基因组学技术发展趋势237

第八章 蛋白质组学技术240

第一节 概述240

一、蛋白质组学240

第二节 蛋白质组学相关技术原理242

一、蛋白质样品制备技术242

二、蛋白质样品分离技术245

三、蛋白质样品鉴定技术251

四、蛋白质组生物信息学252

第九章 测序及人工合成技术253

第一节 DNA序列测定253

一、基因组测序253

第二节 DNA的化学合成267

一、固相亚磷酸酰胺三酯法267

第三节 蛋白质和多肽的氨基酸序列测定269

一、测定蛋白质的一级结构前的准备工作269

二、氨基酸组成分析270

三、蛋白质的末端测定272

四、亚基拆离、肽链降解和肽段的分离273

五、肽段的氨基酸顺序测定274

第四节 蛋白质多肽的固相合成275

一、多肽的固相合成276