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第1篇生物工程常用实验技术及原理1

第1章 生物化学实验基本理论1

1.1 电泳技术1

1.2 PCR技术2

1.3 糖、核酸、蛋白质等生物分子浓度的测定3

第2章 微生物学实验基本理论4

2.1 微生物学实验的意义4

2.2 微生物的显微观察及染色原理4

2.3 微生物的培养及分离纯化7

2.4 微生物的生理生化鉴定8

2.5 微生物的生长繁殖9

第3章 重组DNA技术10

3.1 目的基因的获取10

3.2 基因与载体的连接（以质粒载体为例）11

3.3 重组基因导入受体细胞构建工程菌11

3.4 筛选含有目的基因的受体细胞12

第4章 发酵工程实验原理14

4.1 发酵的基本内容14

4.2 发酵过程的组成14

4.3 发酵罐的类型15

4.4 发酵罐及培养基的灭菌15

4.5 发酵培养基的配制17

4.6 发酵过程的控制17

第5章 常用生物分离实验技术及原理18

5.1 细胞破碎18

5.2 过滤和离心18

5.3 沉淀18

5.4 萃取19

5.5 膜分离20

5.6 色谱20

第6章 生物反应工程实验原理22

6.1 均相酶催化反应动力学22

6.2 生物反应器中氧的传递特性25

第7章 细胞固定化及生物催化原理30

7.1 细胞固定化概述30

7.2 细胞固定化方法30

7.3 生物催化概述31

第2篇实验部分32

第8章 生物化学实验32

实验8.1 部分药品试剂的配制及高压灭菌32

实验8.2 还原糖的测定——3,5-二硝基水杨酸（DNS）比色法34

实验8.3 基因组DNA的分离提取及电泳检测36

实验8.4 DNA浓度及纯度的测定38

实验8.5 蛋白质的SDS-PAGE检测39

实验8.6 牛乳球蛋白基因的PCR扩增及电泳检测40

第9章 微生物学实验41

实验9.1 显微镜的使用及微生物形态的观察41

实验9.2 细菌的革兰染色法44

实验9.3 牛肉膏蛋白胨培养基的制备47

实验9.4 微生物分离、纯化及培养特征观察52

实验9.5 空气中微生物的检测58

实验9.6 淀粉水解实验61

实验9.7 大肠杆菌生长曲线的测定63

第10章 基因工程实验65

实验10.1 E.coli基因组DNA的提取及电泳检测65

实验10.2 glyA基因PCR扩增、检测和纯化67

实验10.3 质粒pET28a的提取及检测69

实验10.4 质粒pET28a-glyA的构建71

实验10.5 感受态细胞的制备和转化73

第11章 发酵工程实验76

实验11.1 实验室常用发酵罐的基本结构与功能76

实验11.2 发酵罐及培养基的灭菌与接种培养技术78

实验11.3 利用大肠杆菌E.coli BL21（DE3）（pET28a-glyA）工程菌表达丝氨酸羟甲基转移酶81

实验11.4 固态发酵法生产柠檬酸85

第12章 生物分离工程实验89

实验12.1 植物细胞的破碎及超氧化物歧化酶的浸提89

实验12.2 考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量91

实验12.3 联大茴香胺盐酸盐法测定超氧化物歧化酶活力93

实验12.4 双水相系统萃取超氧化物歧化酶95

实验12.5 热激和盐析法提取超氧化物歧化酶97

实验12.6 纤维素离子交换柱色谱纯化超氧化物歧化酶99

第13章 生化反应工程实验101

实验13.1 Lineweaver-Burk法测定胰蛋白酶米氏常数101

实验13.2 动态法测定溶氧的体积传质系数104

第14章 酶工程实验107

实验14.1 α-淀粉酶的提取与活力测定107

实验14.2 酵母细胞固定化及催化前手性苯乙酮不对称还原合成手性醇110

附录112

附录1 生物工程实验室安全和规则112

附录2 常用缓冲液的配制118

附录3 常用抗生素和酶的配制121

附录4 常用培养基的配制121

附录5 实验室常用贮存液的配制122

附录6 实验室常用技术参数126

参考文献128