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第一章 白细胞介素—2基础理论1

第一节 白细胞介素—2发现背景1

一、IL—2发现的意义1

二、促有丝分裂淋巴因子和T细胞克隆2

三、白细胞介素名称的由来5

第二节 白细胞介素—2的生物活性和理化性质6

一、IL—2的生物学活性6

二、IL—2的理化性质8

第三节 白细胞介素—2基因与分子结构10

一、IL—2基因10

二、IL—2分子一级结构10

三、IL—2分子高级结构11

四、IL—2分子结构与功能的关系12

第四节 白细胞介素—2受体14

一、IL—2R的结构与作用模式14

二、IL—2R与T细胞免疫反应的调节18

三、IL—2R与T细胞循环进程的调节20

四、IL—2R系统对免疫学和治疗学的影响22

第二章 天然白细胞介素—2的制备、纯化25

第一节 T细胞白血病细胞株Jurkat—FHCRC产生的白细胞介素—2的制备与纯化25

一、筛选分泌IL—2的Jurkat细胞25

二、Jurkat细胞产生IL—2的最适条件25

三、Jurkat细胞产生的IL—2纯化30

第二节 人外周血和人扁桃体淋巴细胞白细胞介素—2的制备与纯化30

一、用人PBL诱生IL—2及其纯化30

二、用人扁桃体淋巴细胞诱生IL—2及其纯化31

一、人脾脏淋巴细胞IL—2的制备32

第三节 人脾脏淋巴细胞白细胞介素—2的制备与纯化32

二、人脾脏淋巴细胞IL—2的纯化37

第四节 纯化天然白细胞介素—2性质鉴别40

一、PHA残留量测定40

二、NIL—2糖蛋白染色46

三、人脾脏纯化IL—2对温度的稳定性47

四、人脾脏纯化IL—2的特异性鉴别49

五、NIL—2纯化过程中IL—2抑制因子的去除51

第五节 天然白细胞介素—2制备及检定要求54

一、人IL—2制备及检定规程54

二、乙型肝炎HBsAg、抗HBc、HBeAg检测方法59

三、丙型肝炎抗体检测方法64

四、PHA残留量测定——PHA血凝测定法66

一、IL—2基因克隆及表达67

第一节 表达人白细胞介素—2重组菌的构建和重组菌的发酵培养67

第三章 重组白细胞介素—2的制备、纯化67

二、rIL—2工程菌的发酵培养70

第二节 重组白细胞介素—2的纯化70

一、rIL—2纯化的一般策略70

二、rIL—2包含体的制备和氧化复性76

三、rIL—2的纯化79

四、rIL—2纯化过程中影响活性的因素84

第三节 重组白细胞介素—2制备和检定规程87

一、基因工程人白细胞介素—2注射剂制造规程87

二、基因工程人白细胞介素—2注射剂检定规程92

三、附录：卫生部人用重组DNA制品质量控制要点95

第四章 白细胞介素—2活性测定103

第一节 白细胞介素—2的生物学测定法103

一、生物测定中常用的细胞103

二、3~H—TdR掺入法104

三、MTT比色分析法106

第二节 白细胞介素—2的免疫学测定法111

一、酶免疫测定法112

二、放射免疫测定法114

第三节 白细胞介素—2标准品117

一、第一国际IL—2标准品的建立117

二、第一国际IL—2标准品的使用119

三、我国建立的IL—2国家标准品119

第五章 白细胞介素—2临床前药理毒理121

第—节 白细胞介素—2代谢动力学121

一、IL—2在小鼠的半衰期121

二、IL—2在人体的半衰期及血浓度122

三、延长IL—2半衰期的方法124

一、对EAC实体瘤的抑制作用及对荷瘤鼠生存期延长作用125

第二节 天然白细胞介素—2与重组白细胞介素—2抗肿瘤效果比较125

二、对S180实体瘤的抑制作用及对荷瘤鼠的生存期延长作用128

三、对U14宫颈癌实体瘤的抑制作用及对荷U14腹水瘤小鼠的生存期延长作用130

第三节 白细胞介素—2毒理学研究132

一、IL—2的急性毒性实验132

二、NIL—2对大鼠的长期毒性试验135

三、NIL—2对家犬的长期毒性试验144

第六章 白细胞介素—2和LAK细胞临床155

第一节 LAK细胞基础155

一、LAK细胞发现及其性质155

二、LAK细胞对小鼠的抗肿瘤作用156

三、LAK细胞活性测定165

四、LAK细胞制备170

一、全身性应用IL—2临床疗效173

第二节 白细胞介素—2的临床疗效173

二、局部应用IL—2临床效果174

三、低剂量IL—2的临床效果179

四、IL—2与其它淋巴因子及化疗、联合应用的临床疗效202

第三节 IL—2/LAK联合应用的临床效果204

一、IL—2/LAK对黑色素瘤、肾癌、非何杰金氏淋巴瘤的临床疗效206

二、IL—2/LAK对恶性胸腹水的临床疗效209

三、IL—2/LAK对其它肿瘤的临床疗效212

四、IL—2与IL—2/LAK联合治疗的疗效比较213

第四节 白细胞介素—2和LAK细胞临床应用的一些新观点219

一、肿瘤治疗中IL—2剂量之争——高剂量与低剂量治疗219

二、IL—2免疫治疗疗效的机理：非特异性LAK活性与特异性T细胞221

第一节 肿瘤浸润淋巴细胞性质224

一、原位TIL的性质224

第七章 白细胞介素—2激活的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)及其临床应用224

二、新鲜分离TIL的性质225

三、IL—2培养激活后TIL的性质226

第二节 TIL的分离和培养227

一、TIL的分离227

二、TIL的培养、增殖231

第三节 IL—2激活的TIL在体内器官及肿瘤组织中的分布特征234

第四节 肿瘤浸润淋巴细胞抗肿瘤作用的实验研究238

一、TIL的体外抗肿瘤作用238

二、TIL的体内抗肿瘤作用240

第五节 TIL的临床应用242

一、国外TIL临床应用242

二、本实验室TIL临床应用246

主要参考文献251