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序1

緒言4

菌株表9

第一部份：實驗15

1.分离有營養缺陷的Tn10插入突變種16

2.位置於特定基因近旁的Tn10插入因子的分離方法21

3.Tn10所導致的缺失突變作用26

4.局部致變作用30

5.分離與刻畫由羥胺導致的λ點突變噬菌體34

6.λamp噬菌體缺失突變種的分离37

7.缺失突變的圖譜39

8.剎用互補作用篩選λgt—his營養系42

9.溶菌斑雜合法47

10.膠體雜合法51

11.利用電子顯微鏡观察DNA53

12.λ噬菌體內營養系DNA轉移至質體上的方法55

13.剎用Tn10引導F’t8lac＋質體插入細菌的染色體中57

第二部份：程序61

1.噬菌體溶菌斑的純化62

Ⅰ 菌株62

Ⅱ 下劃線法；上劃線法62

Ⅲ 挑選溶液斑63

Ⅳ 測定噬菌體的數目63

2.噬菌體母液的製備66

Ⅰ 菌株66

Ⅱ 接種菌體與噬菌體於培養皿上的程序66

Ⅲ 收集噬菌體66

3.備P22轉運噬菌體的簡易方法69

4.噬菌體的純化71

Ⅰ 利用BeckmanSW50.1廻轉器進行氣化銫階段密度梯度離心實验71

Ⅱ 使用SW50.1廻轉器進行氣化銫衡定密度梯度離心實驗72

5.Tn10的移位75

Ⅰ 制造NK337菌株的有瑕疵轉運噬菌體75

Ⅱ 添加P22的尾部於其頭部76

Ⅲ 移位因子的轉運77

6.由攜帶Tn10的菌株中篩選Tets突變種80

7.利用紅色培養基測定攜帶β—乳胺酶基因的λ噬菌體82

8.羥胺的致變作用84

Ⅰ 噬菌體或者營養系基因突變種的分離84

Ⅱ 利用噬菌體共同轉運的技術達成局部致變的效果85

9.λ缺失突變種的篩選88

10.在活體內進行噬菌體的重組與互補實臉90

Ⅰ 噬菌體標準的交配法90

Ⅱ 利用噬菌體的生長能力測定互補作用91

Ⅲ 利用斑點測驗法測定噬菌體（λ或者P22）突變種的互補作用91

11.抽取λ噬菌體DNA96

Ⅰ 甲醯胺法96

Ⅱ λDNA的快速分離98

Ⅲ 剎用可由溫度誘發噬菌體的Sam7潛溶菌制造DNA101Ⅳ λDNA的分股102

12.質體以及細菌DNA的分離104

Ⅰ 大腸菌質體DNA的大量分離104

ⅡA 利用菌落或菌液快速地分離質體DNA或者質體及菌體DNA的程序107

ⅡB 快速分離10m1菌液所含的質體DNA109

13.排除DNA—CsC1溶液中的EthidiumBromide111

14.造λgt的雜種113

Ⅰ DNA的斷裂113

Ⅱ 利用T4DNA接合酶使DNA共价連接113

15.λDNA於活體外裝入噬菌體116

Ⅰ 裝入程序116

Ⅱ 含有熱誘發噬菌體的菌液的製備116

16.利用λDNA轉化感染菌體120

Ⅰ 生長菌體120

Ⅱ 處理菌體120

Ⅲ DNA的轉化感染120

Ⅳ 菌體的貯存121

17.利用大腸菌質體為媒介製造營養系DNA123

18.質體DNA的轉化作用125

19.雜種噬菌體在大腸菌體內的互補作用127

Ⅰ 利用雜種噬菌體溶裂菌體的現象測定互補作用127

Ⅱ 利用雜種噬菌體與帮手噬菌體雙重潛溶的現象測定互補作用128

20.瓊脂糖膠體電泳132

Ⅰ 瓊脂糖膠體132

Ⅱ 瓊脂糖膠體中DNA的染色135

Ⅲ 膠體中核酸的照像法136

Ⅳ 乙二醛膠體138

21.轉移DNA於硝化纖維或者重氮化濾紙上的程序140

Ⅰ 轉移瓊脂糖膠體中的DNA至濾紙上的程序140

Ⅱ 轉移λ溶菌斑中的DNA至濾紙上的程序142

Ⅲ 轉移菌落中的DNA至濾紙上的程序145

22.裂口轉移法製造α—32P—標誌的DNA147

Ⅰ 作用程序147

Ⅱ 去氣核糖核苷三磷酸塩148

Ⅲ 去氧核糖核酸酶148

Ⅳ 82P併入DNA之程度的測定148

Ⅴ 輻射性DNA的回收149

Ⅵ 一般要點150

23.DNA或RNA在固體上的雜合作用152

24.固體上32P的自動輻射照像术155

25.回收瓊脂糖膠體上的DNA156

Ⅰ 玻璃纖維濾片回收法156

Ⅱ 碘化鉀衡定密度梯度回收法158

Ⅲ 利用電泳促成膠體與羥基磷灰石間DNA的轉移158

26.利用EthidiumBromide迅速估計DNA濃度的方法160

Ⅰ 瓊脂糖培養皿法160

Ⅱ 圖環上覆蓋塑膠紙的方法160

27.製備DNA的電子顯微鏡樣品161

Ⅰ 水溶液程序161

Ⅱ 甲醯胺程序162

28.形成雙股雜合DNA的一般程序164

Ⅰ 雙股雜合DNA的製造164

Ⅱ 製備雙股雜合DNA的電子顯微鏡樣品164

29.λcI857Sam7潛溶的株體內酶類的抽取與純化166

Ⅰ 一般程序166

Ⅱ 大腸菌594溶菌液中DNA眾合酶I的純化程序167

Ⅲ 純化大腸菌E1150溶菌液中的T4DNA接合酶169

第三部份：附錄171

1．培養基，药物濃度與補充營養172

Ⅰ 培養基172

Ⅱ 药物濃度177

Ⅲ 補充營養177

2.營養缺陷突變菌株的鑑定179

3．細菌，噬菌體與DNA的貯存方法181

Ⅰ 細菌及噬菌體的貯存181

Ⅱ 貯存的程序181

Ⅲ DNA的貯存182

4.緩衝液以及其他溶液184

Ⅰ 緩衝液185

Ⅱ 其他溶液及濃度186

5．透析膜袋的清洗與處理188

6．度量衡189

Ⅰ 微升之量189

Ⅱ DNA的溶點溫度190

Ⅲ 离心的速度與時間191

Ⅳ 單位換算192

7.利用限制酶修剪DNA193

Ⅰ 方法193

Ⅱ 各種限制酶的特性194

8.λ噬菌體攜帶細菌DNA的能力197

9.λ噬菌體與pBR322質體的遺传結構圖以及限制酶作用的位置198

Ⅰ λ遺传結構圖與2媒介噬菌體198

圖1 λ遺传結構圖200

圖2 —3限制酶的限制座201

圖4 λgt1—λBDNA上的EcoRI限制座203

圖5 λgt4DNA上的EcoRI限制座204

圖6 λgt5—lac5DNA上的EcoRI限制座205

圖7 λgt7—ara6DNA上的EcoRI限制座206

圖8 λ607DNA上的EcoRI限制座207

圖9 λsep6—lac5DNA上的EcoRI限制座208

圖10 Charon4DNA上的EcoRI限制座209

圖11 λ590DNA上的HindⅢ限制座210

圖12 λ760DNA上的HindⅢ限制座211

圖13 λgt30—Ec6DNA上的SalI與XhoI限制座212

圖14 λgt40DNA上的SstI限制座213

Ⅱ PBR322的遺传結構圖214

圖15 PBR322的遺传結構圖215

10.組氨酸操縱基因群的缺失突變圖216

11．用於主培養皿製備的格子紙规格217