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第一篇 基本操作及常用仪器使用1

第一章 生物化学与分子生物学常用技术1

第一节 离心技术1

一、离心技术的基本原理1

二、离心机的类型和主要构造2

三、离心方法6

第二节 核酸的分离与纯化9

一、核酸分离的原则9

二、核酸分离的主要步骤10

三、核酸的浓度、纯度测定和完整性鉴定13

四、核酸的保存14

第三节 蛋白质和酶的纯化15

一、蛋白质分离的原则15

二、蛋白质分离的主要步骤15

三、蛋白质的纯化17

四、蛋白质浓度的测定20

五、蛋白质的保存21

第四节 分光光度技术22

一、分光光度技术基本原理22

二、分光光度计种类、结构和工作原理25

第五节 电泳技术26

一、电泳技术发展史26

二、电泳技术的基本原理27

三、影响电泳分离的主要因素29

四、电泳的分类31

五、常用电泳技术33

第六节 层析（色谱）技术48

一、层析（色谱）技术发展简史48

二、层析方法的一般原理49

三、层析的分类49

四、常见的层析技术50

第七节 聚合酶链反应62

一、PCR的基本原理63

二、PCR的反应条件65

三、常见的PCR种类68

四、PCR技术的应用及其注意事项72

第八节 印迹技术74

一、DNA印迹75

二、RNA印迹75

三、蛋白质的印迹分析75

第二章 基本实验操作77

第一节 洗涤和干燥77

一、玻璃仪器的洗涤清洁77

二、玻璃仪器的干燥78

三、沉淀的过滤和洗涤79

第二节 常用的实验操作技术80

一、吸量管的种类和使用80

二、混匀81

三、保温81

四、过滤82

五、离心沉淀法82

六、实验样品的制备82

第三章 常用仪器84

第一节 分光光度计84

一、仪器组成84

二、使用和维护85

三、注意事项86

第二节 离心机86

一、仪器组成86

二、种类86

三、使用和维护87

第三节 电泳仪88

一、使用方法88

二、注意事项89

第四节 PCR仪89

一、使用方法89

二、注意事项89

第五节 真空冷冻干燥机90

一、使用方法90

二、注意事项90

第六节 高压蒸气灭菌锅91

一、使用方法91

二、注意事项91

第七节 恒温培养箱91

一、使用方法91

二、注意事项92

第八节 生物安全柜92

一、使用方法92

二、注意事项92

第四章 实验室规则及安全防护94

一、实验室规则94

二、实验室的安全与防护94

第五章 实验报告的撰写97

一、实验报告书写的具体要求97

二、书写实验报告的基本内容97

第二篇 经典生物化学实验98

第六章 蛋白质定量分析实验98

实验一 双缩脲法测定血清蛋白质含量98

实验二 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量101

实验三 紫外分光光度法测定蛋白质含量105

实验四 考马斯亮蓝结合法测定蛋白质含量107

第七章 层析实验110

实验五 纸层析法观察转氨基作用110

实验六 葡聚糖凝胶柱层析分离血红蛋白与鱼精蛋白113

实验七 离子交换层析分离混合氨基酸115

第八章 电泳实验118

实验八 醋酸纤维素薄膜电泳118

实验九 SDS-PAGE测定蛋白质的分子量122

第九章 酶学实验126

实验十 血清丙氨酸氨基转移酶活性测定（改良Mohun法）126

实验十一 过氧化氢酶米氏常数的测定129

第十章 分子生物学基础实验132

实验十二 肝组织中核酸的提取和定量分析132

实验十三 DNA的提取及紫外吸收法测定含量——蛋白酶K-酚抽提法135

实验十四 总RNA的提取制备与检测——异硫氰酸胍-酚-三氯甲烷一步法139

实验十五 Northern印迹杂交142

第三篇 综合性实验147

实验一 肝糖原的提取和定量测定147

实验二 BCA法测定蛋白质含量149

实验三 质粒DNA的提取150

实验四 DNA的限制性酶切与琼脂糖凝胶电泳152

实验五 质粒pUC18／GAPDH基因的PCR扩增155

实验六 DNA连接实验159

实验七 重组DNA转化与蓝白斑筛选162

第四篇 自主设计性实验166

概述166

一、设计性实验的内涵166

二、开展设计性实验的目的与意义166

三、设计性实验的界定167

四、设计性实验的教学实施167

附 实验报告范例168

实验一 酪蛋白等电点的测定169

实验二 胰蛋白酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素171

实验三 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用173

实验四 氨中毒实验174

实验五 肾上腺素、胰岛素对血糖浓度的调节作用175

附录一 常用缓冲溶液的配制177

附录二 常用酸碱标准溶液的配制183

附录三 常用酸碱指示剂的配制184

附录四 RCF与转速列线计算图185