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第一章 引言1

一、遗传工程的概念1

二、遗传工程的发展概况1

三、遗传工程所需的微生物学原理3

第二章 遗传工程的载体6

一、质粒载体6

二、单链噬菌体克隆载体10

三、双链噬菌体载体13

四、粘粒载体20

一、原核生物染色体DNA的提取23

第三章 DNA的提取23

二、染色体外DNA的分离24

三、质粒DNA的快速提取26

四、真核生物染色体DNA的提取26

五、DNA浓度和纯度的光学分析27

第四章 限制性内切酶29

一、寄主的限制和修饰29

二、三类限制性内切酶30

三、限制性内切酶的纯化35

四、限制性内切酶反应的终止35

五、识别序列的增加和改造36

二、DNA分子的可见性41

一、电泳的原理41

第五章 凝胶电泳41

三、电泳图谱42

四、凝胶系统43

五、凝胶电泳对外界条件的敏感性43

六、指示染料44

七、转移—吸印／杂交分析44

八、探针的制备——缺口平移法47

第六章 DNA的连接49

一、大肠杆菌和T4噬菌体的DNA连接酶50

二、DNA片段在体内和体外的连接51

三、影响连接反应的因素52

四、平齐末端的连接53

第七章 细菌转化55

一、细菌转化的原理55

二、细菌转化的方法57

三、转化的评估指标59

第八章 重组转化体的鉴定61

一、表现型的鉴定61

二、质粒的提取、纯化和重新转化63

三、限制性酶切图谱的绘制63

四、原位（菌落）杂交65

五、免疫检测法65

六、重组质粒上的基因定位69

七、利用翻译系统对目的基因进行深入研究72

第九章 克隆的策略74

一、目标DNA性质对制定克隆策略的主导作用75

二、选择和筛选方法的可利用性76

三、大鼠前胰岛素原基因的克隆79

第十章 克隆基因在大肠杆菌（E.coli）中的表达81

一、促使外源基因表达的原理和技术81

二、强化外源基因表达的原理和技术84

三、调控序列的分离及其鉴定89

一、cDNA的合成和克隆92

第十一章 cDNA的合成和克隆92

二、cDNA克隆的鉴定96

第十二章 基因文库的构建102

一、外源DNA（即供体DNA）的制备103

二、载体DNA的制备108

三、连接、体外包装和扩增109

四、用噬菌体λ和粘粒两种载体构建基因文库的比较110

第十三章 DNA的序列分析111

一、Maxam和Gilbert的序列分析法112

二、Sanger的序列分析法（末端终止法）115

三、Sanger法与M13克隆系统相结合118

四、DNA序列连续测定法119

第十四章 酵母的遗传工程124

一、酵母的质粒125

二、酵母基因的克隆129

三、利用酵母遗传工程生产乙型肝炎疫苗132

四、利用酵母研究分子生物学134

第十五章 植物的基因工程139

一、Ti质粒139

二、Ti质粒的改造及其应用145

三、嵌合基因（chimaericgenes）的构建150

四、植物细胞的转化155

五、植物基因转移的成就156

六、花椰菜花叶病毒159

七、单子叶植物遗传工程的进展160

第十六章 哺乳动物的基因工程164

一、哺乳动物细胞的选择标记164

二、SV40病毒载体167

三、其他病毒载体系统172

四、基因导入的方法175

五、外源基因在哺乳动物细胞中的表达177

第十七章 重组DNA技术用于医药工业181

一、用重组DNA技术生产胰岛素181

二、用重组DNA技术生产干扰素186

索引189