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第一章 干细胞概述1

一、干细胞的定义与特性1

二、干细胞的分类1

三、干细胞的研究历史及热点2

参考文献5

第二章 干细胞培养技术概述7

第一节 概述7

一、细胞培养的优势7

二、细胞培养的限制7

三、细胞培养的应用8

四、细胞培养的基本条件8

五、细胞培养的无菌原则9

六、细胞实验的注意事项10

七、细胞培养液的成分及配制11

第二节 干细胞常用培养方法13

一、细胞培养方式13

二、原代取材14

三、传代培养16

第三节 干细胞的冻存与复苏17

一、细胞的冻存17

二、细胞复苏的过程19

第四节 细胞污染的检测与鉴定19

一、细胞污染19

二、细胞污染的预防22

第五节 干细胞鉴定方法23

一、细胞形态观察23

二、核型分析24

三、免疫组织化学／荧光染色25

四、分子水平分析27

五、流式细胞分析31

六、细胞亚群分析32

七、绘制细胞增殖曲线33

八、细胞凋亡检测34

第六节 细胞的保存与运输35

一、细胞保存原则36

二、细胞运输原则36

参考文献36

第三章 胚胎干细胞37

第一节 概述37

第二节 小鼠胚胎干细胞38

一、小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养及饲养层细胞的制备38

二、小鼠胚胎干细胞建系40

三、小鼠胚胎干细胞传代、冻存及复苏42

四、小鼠胚胎干细胞的鉴定44

第三节 人胚胎干细胞50

一、人胚胎干细胞的分离及建系50

二、人胚胎干细胞传代、冻存及复苏52

三、人胚胎干细胞的鉴定53

第四节 非人灵长类胚胎干细胞分离及建系方法54

一、引言54

二、饲养层细胞的制备55

三、猴胚胎干细胞的分离及建系55

四、猴胚胎干细胞传代、冻存及复苏57

五、猴胚胎干细胞的鉴定59

参考文献59

第四章 诱导性多能干细胞60

第一节 概述60

第二节 小鼠诱导性多能干细胞61

一、小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养及饲养层的制备61

二、反转录病毒的制备及感染61

三、小鼠诱导性多能干细胞诱导及建系63

四、小鼠诱导性多能干细胞的传代、冻存和复苏64

五、小鼠诱导性多能干细胞的鉴定65

第三节 人诱导性多能干细胞系65

一、引言65

二、反转录病毒制备65

三、供体细胞的取材66

四、人诱导性多能干细胞诱导67

五、人诱导性多能干细胞传代、冻存及复苏69

六、人诱导性多能干细胞的鉴定69

参考文献70

第五章 神经干细胞71

第一节 概述71

一、神经干细胞的来源和特性71

二、神经干细胞的应用72

第二节 神经干细胞的分离、纯化及建系培养72

一、分离室管膜下区72

二、神经干细胞的分离和纯化74

三、流式染色75

四、流式分析及收集75

五、神经干细胞建系培养76

第三节 小鼠胚胎干细胞向神经干细胞的定向诱导分化及神经干细胞的定向分化76

一、小鼠胚胎干细胞向神经干细胞的定向诱导分化76

二、小鼠神经干细胞的定向分化78

第四节 人胚胎干细胞分化成神经前体细胞和多巴胺能神经元79

第五节 神经元的电生理检测过程83

第六节 小鼠成纤维细胞向神经干细胞的定向转分化84

参考文献85

第六章 造血干细胞87

第一节 造血干细胞的概述87

第二节 造血干细胞分离和扩增88

一、引言88

二、重要概念与基本方法89

三、单个核细胞的分离89

四、CD34+细胞分选90

五、CD34+细胞的扩增91

六、造血干细胞冻存和复苏92

第三节 造血干细胞的鉴定92

一、流式细胞仪检测CD34+细胞比率93

二、集落形成单位鉴定94

三、长期培养检测法（LTC-IC）95

参考文献96

第七章 间充质干细胞98

第一节 概述98

一、引言98

二、间充质干细胞的来源和鉴定98

三、间充质干细胞的特性99

四、间充质干细胞的研究进展和临床应用100

第二节 骨髓间充质干细胞100

一、骨髓间充质干细胞的原代取材100

二、骨髓间充质干细胞的传代、冻存和复苏102

第三节 人脐带间充质干细胞103

一、脐带间充质干细胞的原代取材104

二、脐带间充质干细胞的传代、冻存和复苏105

第四节 脂肪间充质干细胞105

一、脂肪间充质干细胞的原代取材105

二、脂肪间充质干细胞的传代、冻存和复苏106

第五节 间充质干细胞的鉴定106

一、形态观察106

二、CD分子的检测107

三、体外分化及鉴定108

参考文献112

第八章 精原干细胞114

第一节 概述114

第二节 小鼠精原干细胞分离培养114

第三节 小鼠精原干细胞的鉴定与移植116

一、小鼠精原干细胞免疫荧光鉴定117

二、小鼠精原干细胞移植117

参考文献120

第九章 干细胞实验室的建设121

一、基础设施建设121

二、细胞培养的洁净间121

三、仪器设备123

四、《药品生产质量管理规范》127

参考文献127

附录128

附录一 缩略语128

附录二 溶液的配制130

一、细胞培养相关溶液的配制130

二、动物实验相关溶液的配制138

三、胚胎操作相关溶液的配制138

四、免疫组织化学染色和流式分选相关溶液的配制140

五、分子生物学实验相关溶液的配制142

六、分离神经干细胞的相关溶液的配制143

附录三 引物145

附录四 试剂147

附录五 耗材153

附录六 仪器155