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第1章 绪论1

1.1 定量细胞学和细胞化学技术发展概况2

1.2 定量技术简介3

第2章 图象分析仪在定量技术中的应用5

2.1 图象分析仪的结构6

2.1.1 图象的数字化6

2.1.2 图象分析仪组成9

2.1.3 彩色图象分析仪构成12

2.2 图象处理的基本方法14

2.2.1 图象预处理14

2.2.4 图象增强15

2.2.2 图象变换15

2.2.3 图象平滑15

2.2.5 图象分割16

2.2.6 图象识别16

2.2.7 伪彩色和彩色图象处理16

2.2.8 图象分析16

2.2.9 三维形态特征提取17

2.3 图象分析仪定量测定方法17

2.3.1 二维几何参数的测定17

2.3.2 灰度参数测量25

2.3.4 纹理参数测定30

2.3.3 色度参数测量30

2.3.5 扫描电镜图象分析31

第3章 细胞形态计量学35

3.1 细胞形态计量的基本方法36

3.1.1 二维图象与三维结构关系36

3.1.2 细胞群体和抽样测量38

3.2 细胞形态参数测量和计算39

3.2.1 测试系统39

3.2.2 面积、周长和点计数法41

3.2.3 体密度的形态测量44

3.2.4 核质比的形态测量45

3.2.5 偏性抽样误差时核体密度的校正46

3.2.6 面密度的形态测量47

3.2.7 比表面的形态测量49

3.2.8 平均截距与比表面50

3.2.9 比膜面与面密度50

3.2.10 长度密度的形态测量51

3.2.11 数密度和面数密度的形态测量52

3.2.12 轴比的形态测量56

3.2.13 平均直径的形态测量57

3.2.14 平均体积的形态测量59

3.2.15 平均表面积的形态测量59

3.2.16 圆偏度和圆球度的形态测量60

3.3 误差的计算61

3.4 图象分析中的体视学测量公式65

3.5 微血管内皮细胞的图象分析和体视学测量69

第4章 定量细胞化学技术及应用75

4.1 细胞化学反应的图象定量分析和体视学测量77

4.1.1 细胞学反应的图象定量测定77

4.1.2 细胞化学反应的体视学测量80

4.2 细胞光度测量在定量技术中的应用82

4.2.1 吸收光度测量和显微分光光度计83

4.2.3 显微荧光测量84

4.2.3 流式细胞光度计的原理及应用85

4.3 X射线微区元素分析在定量细胞化学中的应用96

4.3.1 X射线微区分析的基本原理97

4.3.2 X射线微区分析的基本方法98

4.3.3 X射线微区分析的一般操作步骤99

4.3.4 细胞化学的X射线微区元素分析101

4.4 细胞化学反应的其它定量方法104

4.4.1 显微偏光光度测量104

4.4.2 相差和干涉显微测量105

4.4.3 激光扫描显微镜测量105

4.4.4 扫描隧道显微镜测量106

4.4.5 积分微显象测密术106

5.1 酶细胞化学定义108

第5章 酶细胞化学技术108

5.2 酶细胞化学基本原理109

5.2.1 铅法110

5.2.2 偶联偶氮法110

5.2.3 铁氰化钾还原法111

5.2.4 四唑盐法111

5.2.5 DAB法112

5.2.6 铈法112

5.3 酶细胞化学的一般操作步骤112

5.3.1 影响酶反应的一些因素114

5.3.2 取材和固定115

5.3.3 切片119

5.3.4 孵育122

5.3.5 后固定124

5.3.6 脱水、包埋、超薄切片124

5.3.7 人为产物126

5.3.8 对照实验126

5.4 水解酶的细胞化学方法127

5.4.1 碱性磷酸酶(ALP)128

5.4.2 酸性磷酸酶(AcP)131

5.4.3 非溶酶体酸性磷酸酶133

5.4.4 胞嘧啶单核苷酸酶(CMPase)134

5.4.5 酸性单核苷酸酶135

5.4.6 5′-核苷酸酶(5′-Nase)136

5.4.7 葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)137

5.4.8 3′5′-环核苷酸磷酸二酯酯138

5.4.9 硫胺素焦磷酸酶(TPPase)139

5.4.10 核苷二磷酸酶(NDPase)140

5.4.11 肌苷二磷酸酶(IDPase)141

5.5.12 尿嘧啶核苷二磷酸酶(UDPase)142

5.4.13 烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸酶(NADPase)142

5.4.14 腺苷三磷酸酶(ATPase)143

5.4.15 Ca2+-ATP酶144

5.4.16 Mg2+-ATP酶145

5.4.17 Na+-K+-ATP酶147

5.4.18 腺苷酸环化酶(ACase)148

5.4.19 酯酶150

5.4.20 脂酶151

5.4.21 乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶(AChE和ChE)151

5.5 氧化还原酶153

5.5.1 琥珀酸脱氢酶(SDH)154

5.5.2 乳酸脱氢酶(LDH)155

5.5.4 过氧化物酶158

5.5.5 D-氨基酸氧化酶(D-AAOX)159

5.5.6 a-羟酸氧化酶(a-HAOX)160

5.6 转移酶161

5.6.1 胆碱乙酰化酶(ChAc)162

5.6.2 糖原合成酶164

5.7 异构酶和裂解酶165

5.7.1 尿嘧啶核苷二磷酸葡萄糖醛酸表异构酶165

5.7.2 柠檬酸合成酶166

5.8 酶细胞化学定量测定167

第6章 免疫细胞化学技术170

6.1 PAP技术171

6.1.1 PAP法的基本原理171

6.1.2 PAP复合物的制备171

6.1.3 PAP法操作步骤174

6.2.1 ABC法的基本原理175

6.2 ABC技术175

6.2.2 ABC法的操作步骤176

6.3 胶体金标记技术178

6.3.1 胶体金的制备179

6.3.2 胶体金制备注意事项181

6.3.3 免疫金探针的制备182

6.3.4 光镜免疫金银染色(IGSS)185

6.3.5 光镜彩色免疫金银法(CIGSS)187

6.3.6 透射电镜免疫金染色(IGS)188

6.3.7 扫描电镜免疫金标记190

6.3.8 免疫电镜双重标记和多重标记191

7.1 核酸的三氯化铟染色法196

第7章 核酸细胞化学196

7.2 核酸的钨酸钠染色法197

7.3 DNA的Feulgen-六亚甲四胺银染色法198

7.4 DNA的Feulgen-Shiff-乙醇铊染色法199

7.5 DNA的锇-胺染色200

7.6 RNA的选择性染色201

7.7 核仁组成区嗜银蛋白的银染法202

7.7.1 AgK-NOR染色法203

7.7.2 Ag-NOR颗粒计数及图象定量分析203

7.8 DNA差别染色法204

7.9 核酸定量细胞化学205

7.9.1 核酸定量分析法206

7.9.2 肿瘤DNA定量细胞化学的临床应用206

第8章 蛋白质细胞化学技术209

8.1 蛋白质的二硝基氟苯法209

8.2 蛋白质的丙烯醛法211

8.3 高硫蛋白质的六亚甲四氨银法211

第9章 糖类细胞化学214

9.1 糖蛋白的过碘酸-六亚甲四胺银法214

9.2 糖原和糖蛋白的氨基硫脲-蛋白质酸银法216

9.3 粘液的六亚甲四胺银法217

10.1 保存脂类的特殊脱水包埋法218

第10章 脂类细胞化学218

10.2 胆固醇的Schultz改良法219

10.3 毛地黄皂甙保存胆固醇及超微结构定位220

10.4 磷脂的保存及超微结构定位222

第11章 离子细胞化学技术223

11.1 钙离子的焦梯酸盐法223

11.2 磷酸盐离子的超微结构定位225

11.3 氯离子的银沉淀法226

11.4 重金属的硫化物-银法227

第12章 生物胺细胞化学229

12.1 生物胺的重铬酸盐法229

12.2 生物胺的丙烯醛-重铬酸盐法230

12.3 中枢神经组织中胺的超微结构定位231

12.4 生物胺的嗜铬反应231

第13章 细胞原位杂交技术233

13.1 原位杂交一般操作步骤234

13.1.1 固定234

13.1.2 探针的制备235

13.1.3 原位杂交条件的控制237

13.2 生物素标记DNA探针的原位杂交法238

13.3 原位杂交技术的一些进展241

附录 常用缓冲液等溶液的配制244

参考文献250