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第一章 PAP技术1

第一节 技术方法1

一、基本原理2

二、双向PAP等位基因特异性扩增技术3

三、多重剂量PAP技术4

四、连接反应介导的PAP技术5

五、基于PAP法的重测序技术6

第二节 应用实例7

一、MAP技术检测外周循环血中肿瘤突变标志物以监测非转移性乳腺癌复发7

二、PAP结合荧光定量PCR技术（RT-PAP）检测体细胞突变9

第三节 展望13

第二章 ARMS技术15

第一节 基于电泳检测的ARMS技术15

第二节 基于荧光探针检测的ARMS技术21

第三章 高通量测序技术26

第一节 Roche 454测序技术26

第二节 Illumina Solexa测序技术29

第三节 Applied Biosystems SOLiD测序技术32

第四节 Helicos Biosciences tSMSTM测序技术36

第五节 Pacific Biosciences SMRT测序技术38

第六节 Oxford Nanopore纳米孔单分子测序技术41

第四章 数字化PCR技术45

第一节 微球-微乳相数字化PCR技术平台45

第二节 微阵列式数字化PCR技术平台48

第三节 微液滴式数字化PCR技术平台52

第五章 基于纳米金探针的可视化检测66

第一节 耦联模板扩增反应的纳米金探针检测技术66

第二节 耦联信号扩增反应的纳米金探针检测技术71

第三节 基于纳米金的试纸条技术75

第四节 基于纳米金探针的生物条形码技术80

第五节 基于纳米金的其他检测技术86

第六章 基于核酸侵入反应的基因突变检测技术97

第一节 级联核酸侵入技术97

第二节 核酸侵入反应耦联切刻内切酶信号扩增法101

第三节 核酸侵入反应耦联纳米金探针可视化检测法104

第四节 核酸侵入反应耦联延伸链置换信号扩增法107

第七章 焦磷酸测序技术112

第一节 焦磷酸测序技术原理112

第二节 焦磷酸测序检测仪器114

一、商品化焦磷酸测序仪114

二、自制单通道小型焦磷酸测序仪114

三、自制8通道焦磷酸测序仪115

第三节 焦磷酸测序技术在基因突变检测中的应用117

一、肿瘤分子靶向个体化治疗117

二、病毒检测及耐药性鉴定121

三、遗传疾病诊断124

四、细菌耐药基因突变检测126

第四节 展望126

第八章 液相芯片技术131

第一节 概述131

一、引言131

二、技术特点132

第二节 原理及应用132

一、方法原理132

二、应用实例137

三、展望140

第九章 微阵列芯片技术142

第一节 微阵列芯片技术概述142

一、概念143

二、特点143

三、分类144

四、制作技术144

五、基本操作原理147

第二节 铺瓦式阵列技术150

第三节 直接等位基因特异性荧光检测技术152

第四节 辅助寡核酸链检测技术153

第五节 基于连接酶检测反应技术154

第六节 基于肽核酸检测技术155

第七节 微阵列芯片技术展望156

一、药物基因组学与合理用药156

二、微阵列芯片技术在合理用药中的应用前景157

三、微阵列芯片技术检测微生物存在的问题157

四、展望159

第十章 COLD PCR技术164

第一节 Full-COLD PCR技术和Fast-COLD PCR技术164

第二节 Ice-COLD PCR技术168

第三节 Temperature-Tolerant COLD PCR技术171

第十一章 限制性片段长度多态性聚合酶链反应技术177

第一节 RFLP-PCR技术177

第二节 错配RFLP-PCR技术180

第三节 巢式RFLP-PCR技术182

第十二章 杂交链式反应技术187

第一节 基本的HCR反应原理187

第二节 HCR调控的荧光银纳米簇检测法188

第三节 基于嵌二萘探针的HCR检测方法191

第四节 耦联G四联体的HCR检测方法193

第十三章 蓝白斑筛选技术198

第一节 方法原理198

第二节 应用实例199

一、抗肌萎缩蛋白基因突变检测199

二、肿瘤相关EGFR基因突变检测201

第三节 展望202

第十四章 液体活检技术205

第一节 循环肿瘤DNA的检测205

一、循环肿瘤DNA的来源与意义205

二、循环肿瘤DNA的提取与富集205

三、循环肿瘤DNA检测技术206

四、循环肿瘤DNA在临床诊断检测中的应用210

第二节 循环肿瘤细胞的检测211

一、循环肿瘤细胞的来源与意义211

二、循环肿瘤细胞的富集与鉴定212

三、循环肿瘤细胞检测技术214

四、循环肿瘤细胞在肿瘤检测中的应用215

第三节 外泌体的检测216

一、外泌体的来源与意义216

二、外泌体的提取与富集217

三、外泌体检测技术219

四、外泌体在临床诊断检测中的应用221