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第一章 毒理学实验基础1

第一节 毒理学实验的原则和局限性1

第二节 毒理学毒性评价试验的基本目的3

第三节 动物实验的职业道德4

第四节 实验动物的选择和管理5

一、实验动物物种的选择5

二、实验动物品系的选择5

三、对实验动物微生物和寄生虫控制的选择7

四、个体选择8

五、实验动物的管理9

第五节 受试物和样品的准备9

第六节 实验动物的准备和操作11

第七节 实验动物染毒和处置14

一、实验动物染毒14

二、实验动物生物标本采集及处死18

第八节 毒理学试验的统计学基础20

一、毒理学试验设计要点20

二、毒理学试验的统计学要点23

三、统计学意义、生物学意义和毒理学意义25

第九节 优良实验研究规范27

第十节 转基因动物模型28

一、转基因动物的培育原理与技术方法28

二、转基因动物模型在毒理学中的应用30

第二章 一般毒性试验34

第一节 急性毒性试验34

一、经口急性毒性试验34

二、经呼吸道静式吸入急性毒性试验38

三、经皮肤急性毒性试验39

第二节 局部毒性试验39

一、急性眼刺激试验40

二、阴道黏膜刺激试验42

第三节 亚慢性毒性试验44

第三章 特殊毒性试验47

第一节 致突变试验47

一、鼠伤寒沙门菌营养缺陷型回复突变试验47

二、哺乳动物细胞基因突变试验51

三、染色体畸变分析56

四、小鼠骨髓细胞微核试验59

五、单细胞凝胶电泳技术60

第二节 致癌试验63

一、哺乳动物细胞体外恶性转化试验63

二、哺乳动物长期致癌试验65

第三节 发育毒性和致畸作用试验66

一、三段生殖毒性试验67

二、大鼠体外全胚胎培养试验72

三、胚胎干细胞实验77

第四章 分子毒理学实验83

第一节 生物大分子的分离与纯化83

一、组织与细胞核酸的分离与纯化84

二、组织与细胞蛋白质的分离与纯化88

第二节 生物大分子损伤的检测93

一、DNA链断裂93

二、DNA交联95

三、DNA加合物97

四、DNA氧化产物98

五、蛋白质氧化产物101

第三节 基因突变和多态性检测105

一、DNA印迹105

二、荧光原位杂交107

三、聚合酶链反应-单链构象多态性分析109

四、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析112

五、微卫星分析113

第四节 基因表达及调控检测114

一、基因差异分析技术114

二、DNA甲基化119

三、差异蛋白质组学技术120

第五节 基因转染和沉默123

一、基因转染123

二、RNA干扰技术126

第五章 细胞毒理学实验128

第一节 细胞毒性的检测128

一、体外细胞毒性试验的种类和选择依据128

二、细胞存活率测定130

三、细胞增殖测定132

四、细胞代谢活力测定133

第二节 细胞形态学研究135

一、普通显微镜观察方法135

二、电子显微镜观测技术137

第三节 细胞凋亡的检测140

一、形态学观察方法140

二、生化特征检测方法142

第四节 流式细胞仪分析技术145

一、流式细胞仪的检测原理和应用145

二、细胞周期检测146

三、细胞凋亡检测147

第五节 免疫细胞化学149

一、免疫细胞化学染色方法149

二、免疫荧光细胞化学150

三、免疫酶联细胞化学151

四、亲和免疫细胞化学152

第六节 激光共聚焦显微镜和荧光标记技术154

一、激光扫描共聚焦显微镜154

二、荧光标记技术156

三、细胞内钙离子测定157

第六章 血液毒理学研究159

第一节 红细胞毒理学检测159

一、网织红细胞计数159

二、红细胞渗透脆性试验160

三、高铁血红蛋白含量测定161

四、变性珠蛋白小体测定161

五、碳氧血红蛋白测定162

六、铁动力学试验163

第二节 白细胞和血小板毒理学检测163

一、白细胞墨汁吞噬试验163

二、血小板黏附试验164

第三节 凝血功能毒理学检测165

一、活化部分凝血活酶时间测定166

二、血浆凝血酶原时间测定167

三、血浆凝血酶时间测定168

第四节 骨髓毒理学检测168

一、骨髓细胞学检查168

二、外源性脾结节测定170

三、体内扩散盒琼脂培养技术171

四、骨髓微循环观察171

第七章 免疫毒理学研究172

第一节 免疫抑制检测方法172

一、体液免疫功能测定172

二、淋巴细胞增殖试验175

三、细胞免疫功能测定176

四、NK细胞活性测定177

第二节 变态反应检测方法179

一、皮肤变态反应测定179

二、豚鼠支气管激发试验180

第八章 生殖毒理学研究182

第一节 生殖毒性试验182

一、一代生殖毒性试验182

二、两代（多代）生殖毒性试验184

第二节 环境内分泌干扰物生物学活性检测185

一、大鼠子宫增重试验185

二、雌激素受体竞争结合试验186

三、MCF-7细胞增殖试验188

四、雄激素受体介导的转录激活试验189

五、雌激素受体介导的转录激活试验190

六、甲状腺激素受体介导的转录激活试验191

第三节 精子动力学分析193

第四节 性激素水平分析194

一、血清或睾丸（卵巢）组织匀浆液中促卵泡激素含量测定194

二、尿液中促卵泡激素含量测定196

三、尿液中人绒毛膜促性腺激素含量测定198

第九章 神经毒理学研究200

第一节 神经毒性评价方法200

一、迟发性神经毒性试验200

二、形态学方法202

三、生理与生物化学方法204

四、分子生物学方法211

五、电生理实验方法214

第二节 神经行为功能评价方法215

一、FIOH测试组合215

二、WHO-NCTB测试组合216

三、NES方法216

第三节 行为发育毒性测试方法216

一、行为发育毒性测试组合216

二、行为发育毒性研究组合218

第十章 呼吸毒理学研究223

第一节 整体实验研究方法223

一、肺功能测定223

二、整体动物药物引喘法226

三、在体支气管肺泡灌洗与支气管肺泡灌洗液分析227

第二节 离体试验法228

一、离体肺灌流与分析228

二、离体气管片实验法229

三、胎鼠肺细胞原代培养与上皮细胞纯化231

第十一章 肝脏毒理学研究233

第一节 肝损害的体内评价方法233

一、肝微粒体制备及相关酶活性测定233

二、肝脏排泄功能测定237

三、肝脏分泌功能测定240

四、肝纤维化测定242

第二节 肝损害的体外评价方法244

一、体外离体肝灌流与分析244

二、大鼠肝细胞原代培养试验方法245

三、肝细胞膜流动性检测——荧光偏振法248

四、肝细胞线粒体膜通透性转运孔检测——荧光分光光度法250

第十二章 肾脏毒理学研究253

第一节 体内实验253

一、尿液的一般生化指标253

二、肾脏血流动力学和血流量分析254

三、肾小球滤过率和肾脏清除率测定256

四、肾脏的微穿刺和微灌注技术与应用261

五、电子探针微分析法262

第二节 体外试验263

一、体外细胞培养与细胞毒性试验263

二、肾膜囊泡的分离与应用264

第十三章 心血管毒理学研究265

第一节 心功能评价方法265

一、心电图265

二、心向量图265

三、心排血量266

四、心阻抗血流图266

五、超声心动图266

六、磁共振技术266

第二节 心血管毒理学体外研究方法267

一、心肌细胞原代培养267

二、大鼠血管内皮细胞原代培养268

第三节 心血管毒理学体内研究方法269

第十四章 皮肤毒理学研究271

第一节 皮肤刺激性与腐蚀性试验271

一、家兔皮肤刺激性与腐蚀性试验271

二、急性眼刺激性与腐蚀性试验275

三、人体斑贴试验278

四、人体皮肤试用试验279

第二节 皮肤变态反应和皮肤光毒性试验280

一、豚鼠皮肤变态反应试验280

二、小鼠致敏试验283

三、皮肤光毒性试验284

四、人体激发斑贴试验286

第三节 皮肤接触性荨麻疹试验287

一、非免疫接触性荨麻疹试验287

二、免疫接触性荨麻疹试验288

主要参考书目291